| 研究課題/領域番号 |
16K18935
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| 研究機関 | 福井大学 |
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研究代表者 |
森田 美穂子 福井大学, 学術研究院医学系部門(附属病院部), 医員 (40623872)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 相乗効果 / 抗腫瘍効果 / 細胞死 / XOD活性 |
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| 研究実績の概要 |
白血病CEM細胞で研究を遂行している。
XTT assayにより、細胞増殖抑制を評価した。6MPのIC50は 0.9 μM、Febuxostatとallopurinolは100 μMの濃度でもIC50に達しなかった。これより6MPの抗腫瘍効果を確認した。
6MPとFebuxostatおよびallopurinolの併用効果を評価するためにcombination index (CI)を測定した。 6MPとfebuxostatの併用では0.114を呈し、6MPとallopurinolの併用でも0.119であり、いずれも明らかな相乗効果と確認できた。
細胞死を評価するためにアネキシンVを用いて、フローサイトメトリーを実施した。6MPと両XOD阻害薬（febuxostatおよびallopurinol）併用でアポトーシスの増加は認めなかった。
XOD活性測定として、キサンチンオキシダーゼ蛍光分析を行い、浮遊細胞においてもXOD活性の検討が可能なことを確認した。コントロールのXOD活性は 84 μU/mlであった。febuxostat存在下での2，6，24時間でのXOD活性はそれぞれ74.7 μU/ml、 67.8 μU/ml、45.8 μU/mlであった。同様にallopurinol存在下でのXOD活性は2，6，24時間でそれぞれ71.0 μU/ml、60.8 μU/m、55.0 μU/mlであった。allopurinolの6時間XOD活性は、febuxostatよりも強力なXOD阻害作用を示唆し、これはオキシプリノールの作用によると考えられた。24時間値のXOD活性はfebuxostatはアロプリノールより長時間強力にXOD阻害活性を有することを示唆すると考えられた。また、6MPそのものは、XOD活性の6MPとの併用実験において、6MPそのものによるXOD阻害作用がないことを確認した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
XOD活性測定は、検出感度以下のごく微量であることも多く、測定に失敗することも多いため。
細胞死の検討においては、予想と異なる結果であり、再現実験を繰り返したり、その原因探求に時間がかかっているため。また至適実験濃度の設定にかかわる準備実験に難渋しているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
現時点ではアポトーシスの実験結果は、予想に反するものであったため、実験繰り返し、再現性を高める。
抗腫瘍効果、相乗効果と比して、アポトーシスにおいてなぜ想定外の結果になっているのか、多々の研究とも比較し検討を加える。
Febuxostatとアロプリノールのデータ比から、Febuxostatと6MPの併用時の指摘用量の換算が可能か検討する。
浮遊細胞での結果を踏まえて、肝細胞など固形細胞での検討も考慮する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当該年度において、通常臨床診療内での研究へのeffort比率が低下してしまい、実験の進捗がやや遅れたために、必要物品の購入などが当初計画より減少・不要であったため。
臨床業務を行いつつも、実験にかけるeffortを可能な限り当初の予定通り維持するように努力し、実験のスムーズな進捗をはかる。
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