| 研究課題/領域番号 |
16K18955
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
松本 准 国際医療福祉大学, 薬学部, 助教 (60709012)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | CYP3A5 / CYP3A4 / 薬理遺伝学 / 薬物動態学 / 遺伝子多型 / CYP3A5*3 / C型肝炎 / Direct Acting Antivirals |
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| 研究実績の概要 |
C型肝炎は、C型肝炎ウイルス（HCV）が感染することで発症するウイルス性肝炎である。近年、新規C型肝炎治療薬（DAAs、Direct Acting Antivirals）の発展が目覚ましく、特に2015年に販売されたソホスブビル（SOF）/レジパスビル（LDV）配合錠のHCV除去率はほぼ100%であり、かつ重篤な副作用も発生しないことが報告されている。しかしながらDAAsの薬価は極めて高く、一度治療を開始したDAAsに中断や変更が生じた場合、医療財政に及ぼす影響は極めて大きい。そこで本研究では各患者に最適なDAAsの提供を目指し、多くのDAAsの代謝に関わることが考えられるCytochrome P450（CYP）3Aサブファミリーのうち、CYP3A5の遺伝的多様性に着目し、DAAsの選択・使用の個別適正化におけるCYP3A5遺伝情報の有用性を検証することを目的とした。
本年度は、まずCYP3A5で代謝を受けるDAAsの簡易的スクリーニング（申請者が本研究のために考案した方法、現在欧文論文投稿中）を行った。その結果、検討したDAAsのうち5種類はCYP3A5により代謝を受ける可能性が示唆された。次に、各DAAsの定量法の確立を試みたところ、HPLC-UVもしくはLC/MS/MSを用いることで、各DAAsの定量を行うことが可能となった。これらの結果は、現在学会発表の準備中であり、またDAAsの定量法に関しては、欧文論文を投稿準備中である。また、本年度は予想以上に各検討が進行したことから、次年度に行うことを予定していた内容のうち、CYP3A5で代謝を受けることが示唆されたDAAsに対し、本年度確立した定量法を用いてCYP3A5発現系ミクロソームによる代謝実験を行った。総じて、本研究は当初の計画以上に順調に進行している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
本年度に計画していた内容としては、大きく分けて①CYP3A5が代謝に関わるDAAsの簡易的スクリーニング、および②DAAs定量法の確立、の2項目である。
CYP3A5が代謝に関わるDAAsの簡易的スクリーニングに関しては、各薬物によるCYP3A4阻害作用の検討のために市販されているP450 Glo Assay SystemをCYP3A5に応用することで、CYP3A5が代謝に関わる薬物の簡易的スクリーニング法を本研究のために考案した。考案したスクリーニング法により、各DAAsの代謝にCYP3A5が関わるかを検討したところ、検討したDAAsのうち5種類に関しては、CYP3A5で代謝を受ける可能性が示唆された。
DAAs定量法の確立に関しては、HPLC-UVもしくはLC/MS/MSを用いることで、各DAAs定量法の確立を試みた。その結果、製薬企業が提供している医薬品インタビューフォーム上に記載されている各DAAsの血中濃度域を測定することのできる定量法を確立することに成功した。各定量法の確立に際しては、数種類のDAAsの定量を同時に行うことを考慮し、定量の効率化を図ることとした。
また、当初計画していた上記の検討が予想以上に進行したことから、これらに加えて、次年度に予定していたCYP3A4-5間の各DAAs代謝活性の差に関する検討を一部開始した。特に、先述したスクリーニングにおいてCYP3A5が代謝に関わることが示唆されたDAAsを重視し、CYP3A5発現系ミクロソームを用いて代謝実験を行い、基質減少の程度を検討した。さらに、本研究助成申請後に新たに販売されたDAAsに関しても、CYP3A5が代謝に関わるか簡易的にスクリーニングを行い、それぞれ定量法を確立した。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度の検討において、今後本研究の実施上大きな問題となることが考える事象は生じなかった。特に各DAAs定量法の確立においては、DAAsの種類が多いことから当初難航することも考えられたが、数種類のDAAsを同時に定量することを心掛け、それぞれ定量法を確立することに成功した。今後、確立した定量法を用いることで、各DAAsの代謝実験が可能となることが考えられた。
次年度に行う内容としては、各DAAsに対するCYP3A4-5間における薬物代謝活性の比較を行うことで、各DAAsの代謝に対する薬物動態学的パラメータを基礎的な観点から算出することにより、その後の患者検体を用いた臨床的な検討において土台となるデータの取得を行う。具体的には、本年度に行った簡易的スクリーニングによりCYP3A5で代謝を受けることが考えられたDAAsに対して、CYP3A4もしくはCYP3A5発現系ミクロソームを用いて代謝実験を行うことにより、各DAAsの減少の程度がCYP3A4-5間でどの程度異なるかを検討する。その後、CYP3A5が深く代謝に関与することが考えられるDAAsに関しては、代謝反応後の各代謝物の生成量に関する検討も行う。最終的にはHAB研究機構より取得したヒト肝ミクロソームを用いて、各ミクロソームのCYP3A5遺伝子型を明確にし、CYP3CIDE（CYP3A4選択的阻害剤）およびケトコナゾール（CYP3A阻害剤）を用いることで、各DAAsの代謝におけるCYP3A5の寄与の程度を算出する。これらの基礎的な検討により、CYP3A5が代謝に深く関与することが考えられたDAAsに関して、今後の臨床検体の収集に係る倫理審査委員会への申請、および臨床検体収集に係る下準備を開始する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本研究計画の中で、本年度に予定していたCYP3A5が代謝に関わる各DAAsの簡易的スクリーニングが予定より早く終了した。そのため、その後に予定していた各DAAsの定量法の確立に関しても、予定より早く終了した。したがって、次年度に予定していたCYP3A4-5間の各DAAs代謝活性の差に関する検討を前倒しで行い、基礎的な検討を推し進めることで、最終的に臨床検体の取得期間の延長を行うこととした。
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| 次年度使用額の使用計画 |
使用計画は当初の予定と大きく変わらず、CYP3A4-5間の各DAAs代謝活性の差に関する検討を行うために必要な試薬等を前倒しで購入した。特に必要な試薬等に関しては、代謝反応に必要な溶液や、CYP3A発現系ミクロソームである。また、本研究助成申請後に新たに販売されたDAAsを購入、また本研究の範疇とすることで、最新の薬物に関しても検討を行うこととした。
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