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Clostridium (Clostridioides) difficileは医療関連感染の原因菌であり、その症状は下痢から腸閉塞や消化管穿孔まで幅広く、死亡例の報告も稀ではない。通常、C. difficile感染症の重症例ではメトロニダゾールやバンコマイシンによる治療を行うが、治療後の再燃・再発が多いため、他の治療・予防法が必要とされている。そこで、本研究では毒素をターゲットにしたワクチンを開発することを目的とした。毒素をターゲットにしたワクチンはトキソイドが一般的であるが、毒性復帰などの副反応の問題があるため、副反応を考慮した安全性の高いワクチンとして、毒素の活性領域を除いたDNAワクチンを考えている。
昨年度構築したToxin Bに対するDNAワクチンの有用性をin vitro実験系において確認できたことから、本年度はin vivo実験系での効果を調査した。本DNAワクチンで免疫したマウスの血清とToxin Bを混合し、一定時間反応させた後、マウス腹腔内に投与し、生死判定を行った。コントロールマウスの血清と混合したToxin Bを投与したマウス群では、投与後数日で全てのマウスが死亡したが、免疫マウスの血清と混合したToxin Bを投与したマウス群では、投与後一週間経っても全てのマウスが生存していた。また、Toxin BとToxin Aは一次構造の相同性が90%であることから、本DNAワクチンがToxin Aにも効果があるかを調べたところ、本DNAワクチンを免疫したマウスの血清中にToxin Aに反応する抗体が存在することがwestern blotで認められ、さらに、Toxin Aの細胞障害活性の中和能を有していることがin vitroおよびin vivo実験系で確認することができた。
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