| 研究課題/領域番号 |
16K19588
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
青山 泰之 東海大学, 医学部, 助教 (50648475)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | LOH / 次世代シーケンシング / SS-SBT法 / HLA遺伝子 |
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| 研究実績の概要 |
HLA不一致の同種造血幹細胞移植（Allo-HSCT）後の再発時に，レシピエント固有のHLA消失（LOH: loss of heterozygosty）症例が報告されているが，その機序は明らかにされていない．Allo-HSCTの移植後再発は予後が極めて悪いことで知られており，LOHの機序解明は，再発予防法の開発への重要な情報となると考える．そこで，LOHが腫瘍の免疫応答回避に関与しているという仮説のもと， HLA不一致allo-HSCT後の再発症例に対し，LOHの経時的変化を検証することを目的とした．解析法は，新たなLOH検索法となり得るSS-SBT法を選択した．本法は，従来法のSNPやマイクロサテライト解析（MS）では実現できなかった，LOHを生じたHLAの定性的特定およびLOHクローンの定量的検出が期待できる．
今年度は，HLA一致・不一致移植における再発時のHLA領域LOHがSS-SBT法で検出可能かを検証した．複数再発18症例の移植前および再発時のDNAを用いた．方法は，（１）HLA領域内の8マーカーによるMS解析で，LOH症例を特定し，（２）LOHおよび非LOHの計5症例に対しSS-SBT解析を実施した．
結果，MS解析によりLOHが認められた2症例は，SS-SBT解析においてもLOHが確認され，同時に消失したレシピエント固有アリルを特定した．HLA一致症例においては，ヘテロにおけるアリルリード数の比率に偏りが認められ，片側アリルがLOHを生じた可能性が示唆された．また，LOH有無の特定率は，MS解析では33%であるのに対し，SS-SBT法では100%であった。
以上により，本法がAllo-HSCTのHLA不一致のみならず一致症例においても新規LOH解析ツールとして有用であることが明らかになった．更に，従来法に比べ，より高確率でLOHの検出が可能であることが示された．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究目的として掲げた，HLA一致および不一致Allo-HSCT再発時におけるHLA領域のLOH検出ツールとしてSS-SBT法が活用できるかの検証を平成28年度の研究でおおむね達成している．
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| 今後の研究の推進方策 |
研究目的として掲げた，HLA一致および不一致Allo-HSCT再発時におけるHLA領域のLOH検出ツールとしてSS-SBT法が活用できるかの検証を平成28年度の研究で達成した．
平成29年度は，研究計画に従い，以下の項目を実施することを目的とした．（１）再発に至るまでの経時的なLOH変化，および（２）再々発症例におけるLOH変化を観察するために，LOHを確認した2症例の複数検体（移植前，1回目移植後，1回目再発時，2回目移植前，2回目移植後，2回目再発時）に対し，有用性を確認したSS-SBT法によるLOH解析および定量性の検討を実施する．得られた解析情報と臨床データを基に，腫瘍がLOHを獲得したことによりドナーからの免疫反応を回避している可能性を検証する．
更に，上記の対極仮説として，（３）LOHを有するクローンは移植後に獲得されるのではなく，白血病発症時（移植前）に既に存在していた可能性を検証する必要がある．そこで，急性骨髄性白血病，急性リンパ性白血病を対象に複数症例の初発時芽球細胞から得たDNAを用いてSS-SBT解析を実施し，LOHの有無を検証する予定である．
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