女性ダノン病iPS細胞由来心筋を用いたXISTの役割と遺伝子治療の可能性について

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K19632
• 研究機関: 金沢大学
• 研究代表者: 吉田 昌平 金沢大学, 附属病院, 助教 (30623657)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: ダノン病 / iPS細胞 / X染色体不活性化

研究実績の概要

既に作成した女性ダノン病患者Tリンパ球より樹立したiPS細胞より、正常LAMP2mRNAを発現するクローン(WT)、異常LAMP2mRNAを発現するクローン(MT)のクローニ ングを行い、心筋分化させた。分化心筋に対するLAMP2の免疫染色ではWTから作成した分化心筋(WT-iPSC-CMs)に対してはLAMP2の染色が認められ たが、MTから作成した分化心筋(MT-iPSC-CMs)に対してはLAMP2蛋白の発現が認められなかった。光学顕微鏡での観察においては特に差異を認めなかったが、 透過電子顕微鏡での観察においてMT-iPSC-CMsではその心筋細胞内に自己貪食空胞の存在が確認された。また、バキュ ロウイルスを用いたtandem fluorescent LC3 assayを行い、MT-iPSC-CMsにおいてはファゴソームにライソソームが結合し、オートライソソームとなる過程での 成熟不全が認められることを確認した。更にLC3に対するwestern blotでは、通常状態でのLC3-II分画の増加がMT-iPSC-CMsにおいては認められており、相対的に プロテアーゼインヒビタ ーを使用しても、LC3-II分画の増加が認められないことを確認した。以上の差異について、ヒトアンドロゲンレセプター抗体のCAGリピートを用い、X染色体の不活化の差異が反映されているということを証明し、本研究はJ Mol Cell Cardiol. 2018 Jan;114:234-242. doi: 10.1016/j.yjmcc.2017.11.019.に発表した。また、ヨーロッパ心臓病学会においても、X染色体の不活性化によるiPS細胞の際について発表を行った。

研究成果

• [雑誌論文] Characteristics of induced pluripotent stem cells from clinically divergent female monozygotic twins with Danon disease. (2018)
  • 著者名/発表者名: Yoshida S, Nakanishi C, Okada H, Mori M, Yokawa J, Yoshimuta T, Ohta K, Konno T, Fujino N, Kawashiri MA, Yachie A, Yamagishi M, Hayashi K.
  • 雑誌名: Journal of Molecular and Cellular Cardiology 巻: 114 ページ: 234-242
  • DOI: 10.1016/j.yjmcc.2017.11.019.
  • 査読あり
• [学会発表] Generation of disease specific iPSC-derived cardiomyocyte and investigation of their characteristics: study with clinically divergent female monozygotic twins with Danon disease. (2018)
  • 著者名/発表者名: Shohei Yoshida
  • 学会等名: 欧州心臓病学会 Congress 2018
  • 国際学会