| 研究課題/領域番号 |
16K19661
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
青柳 順 自治医科大学, 医学部, 助教 (80438639)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 小児特発性ネフローゼ症候群 / 質量分析法 |
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| 研究実績の概要 |
小児慢性腎疾患において、特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群（ISSNS）は重要な位置を占めており、同疾患の病態解明に寄与する知見を得て、発症予防、及び、治療薬の開発を促進させることを目的として本研究を開始した。この目的のために、ISSNS関連因子を同定し、同時に、標的傷害組織部位を確認することを試みる。我々が先の研究でISSNSのdeep proteinとして同定した、ISSNSの病因候補一次質量ペプチドイオン3個に対し、ペプチドシークエンスタグ法を用い、病因候補蛋白質を同定する。候補一次質量ペプチドイオンは、これまでの申請者の研究結果から、すでに、等電点が判明しているため、① 初期精製には、イオン交換クロマトグラフィーを、② 中間精製には、イオン交換高速液体クロマトグラフィーを、また、質量も判明しているため、③ 最終精製には、ゲルろ過高速液体クロマトグラフィーを行い、目的ペプチドイオンを精製する。精製したペプチドイオンをタンデム質量解析し、分解して得られた生成イオンのピーク間の質量差を測定する。これに、トリプシン処理した時の、ペプチド末端のアミノ酸の種類とその質量の情報をあわせ、病因候補蛋白質を同定する。病因候補蛋白質をラットに投与し、蛋白尿の誘導を確認し、病理学的に病因候補蛋白質の傷害部位を確認する。
今年度は次の実験を行い、結果を得た。前年度に精製した3ペプチドイオンを質量解析し、分解して得られた生成イオンの情報を基にマスコット解析した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ほぼ予定通りに、順調に、進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度に得たペプチドイオンのデータに対し、マスコットサーチを行い、病因候補蛋白質を同定する。つづいて、同蛋白質をネフローゼ患児の血清中に確認し、病勢との関連を調べる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
(理由) 平成29年度は、前年度に精製したペプチドイオン情報を得るに留まり、病因候補蛋白質の同定までに至らなかったため。
(使用計画) 今年度に得られたペプチドイオンのデータに対し、マスコットサーチを行い、得られた情報を基に、病因候補蛋白質を同定する。
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