膵癌新規予後規定因子SLP-2の機能解析-抗癌剤感受性予測因子としての検証-

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K19911
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 有明 恭平 東北大学, 大学病院, 助教 (10754921)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: SLP-2 / 膵癌 / 予後因子

研究実績の概要

本研究の目的は膵癌の新規予後規定因子であるStomatin like protein 2（SLP-2）の機能を明らかにすることにある．SLP-2は多くの癌腫において，発現が予後を悪化させていると報告されているものの，悪性化をきたすメカニズムについては解明されていない．ミトコンドリアに発現が多く，膜電位の安定化に関与していること，発現を抑制することでアポトーシスが誘導されることなどが近年明らかになりつつあるも膵癌における報告はない．本研究ではSLP-2とミトコンドリア由来のアポトーシスについての機能解析を行うことで，抗癌剤感受性への関与を証明し，感受性予測因子としての可能性について検証することにある．

上記目的達成のために初年度は以下の研究成果を上げた．
1)膵癌細胞株を用いたSLP-2安定発現抑制株の作成
SLP-2のsiRNAの配列をデザインしたのちRT-PCR法にて発現量を評価．90%以上のknock downが得られる配列を決定し，これをもとにshRNAを作成した．shRNAの配列を導入し，安定発現抑制株の作成が可能となるプラスミドを作成．これを膵癌細胞株に導入し，G418選択培地により安定発現抑制株及びコントロールとなる安定発現株の作成を行った．結果としてshRNA3種類を用いて，4種類の膵癌細胞株において安定発現株の作成に成功した．今後この細胞株を持ちいて，種々の抗癌剤に対する感受性を評価していく予定である．
2)SLP-2の発現が膵癌における予後及び転移形成能や抗癌剤感受性に及ぼす影響を評価すべく，膵癌切除標本300例を用いて免疫染色法を施行．免疫染色はすでに完了しており，現在その評価を行っているところである．

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

本研究は膵癌細胞株を用いた基礎的研究，動物を用いた生体内での評価および，膵癌臨床検体を用いた研究の3本柱を平行して行い，SLP-2の発現が感受性予測因子になりうることを証明することにある．
基礎的研究を行う上で必要な細胞株を初年度に作成することができたことから，今後この細胞株を用いた機能解析を行うことが可能である．また安定発現抑制株は動物を用いた生体内での評価にも使用が可能であることから，以後の研究がスムーズに遂行されるものと予想される．
臨床検体を用いた研究については，免疫染色はすでに終了しており，今後は解析を行うのみであることから，こちらも順調に遂行しているものと考える．

今後の研究の推進方策

初年度に作成した安定発現抑制株を用いて，機能解析を行う．SLP-2の発現が細胞の増殖能，抗癌剤投与後のviabilityやアポトーシスへの影響について，ミトコンドリアの機能解析を行うとともに明らかにしていく予定である．
また本細胞株を用いて，マウスxenograft modelを作成し，形成された腫瘍に対し抗癌剤を投与することで腫瘍の縮小能やその後の生存期間への影響について検討する．
臨床検体を用いた検討では，発現量と予後との感染性を評価するとともに，SLP-2の発現と抗癌剤投与後の効果についての関連性についても併せて検討していく．

研究成果

• [雑誌論文] Locally advanced pancreatic cancer successfully treated by distal pancreatectomy with celiac axis resection (DP-CAR) after S-1 with radiation therapy followed by gemcitabine/nab-paclitaxel therapy: a case report (2017)
  • 著者名/発表者名: kyohei ariake, Fuyuhiko Motoi, Masamichi Mizuma, Keigo Murakami, Tatsuyuki Takadate, Hiedeo Ohtsuka, Koji Fukase, Kunihiro Masuda, Hiroki Hayashi, Kei Nakagawa, Naoaki Sakata, Takanori Morikawa, Shimpei Maeda, Takeshi Naitoh, Shinichi Egawa, Michiaki Unno
  • 雑誌名: Surgical Case Report 巻: なし
  • DOI: 10.1186/s40792-017-0290-6
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Predictive risk factors of peritoneal recurrence after surgical resection for pancreatic cancer: considering the method to prevent this dismal type of recurrence (2017)
  • 著者名/発表者名: Kyohei Ariake,Fuyuhiko Motoi, Hideo Ohtsuka, Koji Fukase, Kunihiro Masuda, Masamichi Mizuma, Hiroki Hayashi, Kei Nakagawa, Takanori Morikawa, Shimpei Maeda, Tatsuyuki Takadate, Takeshi Naitoh, Shinishi Egawa, Michiaki Unno
  • 雑誌名: Surgery Today 巻: 印刷中 ページ: 印刷中
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] 肝内結石症の診断・治療 (2017)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平， 大塚英郎， 海野倫明
  • 雑誌名: 胆石症・胆管結石 胆道炎・胆道癌 診断と治療のＡＢＣ 巻: 121 ページ: 55-64
• [学会発表] 膵癌原発巣のPETSuvmaxは予後規定因子として有用である (2016)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平
  • 学会等名: JDDW2016
  • 発表場所: 神戸コンベンションセンター
  • 年月日: 2016-11-03 – 2016-11-06
• [学会発表] 膵癌企途切症例に対する薬剤感受性試験(CD-DST法)から見た抗癌剤治療の有用性について (2016)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平
  • 学会等名: 第54回日本癌治療学会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2016-10-20 – 2016-10-22
• [学会発表] Predictive Risk Factors of Peritoneal Recurrence after Surgical Resection for Pancreatic Cancer: Possibility of Intraoperative Dissemination (2016)
  • 著者名/発表者名: Ｋｙｏｈｅｉ Ａｒｉａｋｅ
  • 学会等名: 17th International Association of Pancreatology
  • 発表場所: 仙台国際会議場
  • 年月日: 2016-08-04 – 2016-08-07
  • 国際学会
• [学会発表] 膵癌術後肝転移再発におけるリスク因子の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平
  • 学会等名: 第25回がん転移学会学術集会
  • 発表場所: 米子コンベンションセンター
  • 年月日: 2016-07-21 – 2016-07-22
• [学会発表] 術中操作がもたらす膵癌腹膜播種再発の危険性～予防を目指した臨床研究への取り組み (2016)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平
  • 学会等名: 第71回日本消化器外科学会
  • 発表場所: アスティ徳島
  • 年月日: 2016-07-14 – 2016-07-16
• [学会発表] How to prevent the peritoneal recurrence~ considering the risk factor of peritoneal recurrence after pancreatectomy (2016)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平
  • 学会等名: 第28回日本肝胆膵外科学会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2016-06-02 – 2016-06-04
• [学会発表] 膵癌切除後肝転移再発症例における臨床病理学的因子の検討 (2016)
  • 著者名/発表者名: 有明恭平
  • 学会等名: 第116回日本外科学会
  • 発表場所: 大阪国際会議場
  • 年月日: 2016-04-14 – 2016-04-14