| 研究課題/領域番号 |
16K19915
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
野島 広之 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (10507320)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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| キーワード | エクソソーム / 膵癌 |
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| 研究実績の概要 |
膵癌でのエクソソーム内のmiRNA発現異常を評価するために、まずPanc-1、MIA PaCa-2、BxPC-3、CFPAC-1、AsPC-1の各膵癌細胞株と正常膵上皮細胞株であるHPDE細胞をExosome-Depleted FBSを添加した培養液を用いて48時間培養、抽出した培養液から、超遠心分離法にてエクソソームを分離した。同様に膵癌手術を行った患者の血清から、超遠心分離法にてエクソソームを分離した。エクソソームが分離できているかを、エクソソームの代表的なマーカーであるCD63抗体によるウェスタンブロットを行うと、BxPC-3、CFPAC-1、Panc-1の膵癌細胞株では発現を認めたのに対し、MIA PaCa-2、AsPC-1の膵癌細胞株では発現が減弱していた。正常細胞株においてはCD63抗体によるウェスタンブロットを行ったが、発現を認めなかった。膵癌手術を行った患者の血清でも同様にCD63抗体によるウェスタンブロットにて発現を確認した。電子顕微鏡にてサイズを測定すると、膵癌細胞株であるPanc-1から抽出したエクソソームの平均値は168.5nm、膵癌手術を行った患者の血清から抽出したエクソソームの平均値は180.2nmであった。膵癌細胞株であるPanc-1、健常者の血清、膵癌患者の血清からそれぞれ抽出したエクソソームからRNAを抽出し、バイオアナライザーにてRNAを解析すると、Preliminary dataで示した図と同様、細胞由来のリボソームRNAの発現を認めず、エクソソーム由来のRNAであることを確認した。以上の結果により、膵癌細胞株では、各細胞株によってエクソソームの分泌が異なることが示唆された。また、膵癌患者血清、健常者血清、膵癌細胞株からエクソソーム由来のRNAを同定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
各種膵癌細胞株によってエクソソームの分泌が異なるため、超遠心分離法によるエクソソームの安定した抽出を行うのに非常に時間を要した。膵癌患者血清、健常者血清、膵癌細胞株からエクソソーム由来のRNA抽出を確認したので、次のステップとして、miRNAの抽出、マイクロアレイ法を用いた網羅的解析にて各種エクソソーム由来のmiRNAを評価する。
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| 今後の研究の推進方策 |
本年度で確立させた膵癌患者血清、健常者血清、膵癌細胞株から分離したエクソソーム由来のRNAからのmiRNAの抽出、マイクロアレイ法を用いた網羅的解析を行う。解析により同定された癌で低発現のmiRNAを含んだエクソソームの中で、標的膵癌細胞増殖・浸潤能を制御しているエクソソームを検出する。In vivoで、このmiRNAを含んだエクソソーム投与による腫瘍増大抑制、腫瘍特異的抗体で標識したエクソソーム投与による腫瘍選択性への効果増強の評価を行う。また、膵癌患者の血清由来のエクソソーム内での癌細胞増殖、進展制御しているmiRNA発現低下を認めた場合に予後との関連を検討する。
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