| 研究課題/領域番号 |
16K20098
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
近藤 隆志 広島大学, 病院(医), 病院助教 (20711774)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 悪性高熱症 / 低侵襲的診断法 / 人工多能性幹細胞 |
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| 研究実績の概要 |
従来、悪性高熱症の診断のための機能検査としては筋生検によるCa-induced Ca release（CICR）検査やIn vitro contracture test （IVCT）が必要であり、特に小児患者においては筋生検が全身麻酔を伴う侵襲的検査であることが問題であった。本研究は血液もしくは皮膚から人工多能性幹細胞（iPS細胞）を作成した後、iPS細胞から筋組織を作成して機能解析を行うことで、悪性高熱症の低侵襲的診断法を確立することを目的としている。
本年度はiPS細胞作成およびiPS細胞からの骨格筋細胞作成を確立させることを目標としていたが、血液からのiPS細胞作成が困難であったため、研究立案時に計画していた代替手法としての線維芽細胞を利用した骨格筋細胞作成をiPS細胞作成と並行して開始した。
骨格筋細胞への分化誘導を促す転写因子（MyoD1）を組み込んだ遺伝子発現ベクターをiPS細胞に導入することで、iPS細胞から骨格筋細胞への分化を促進させることができると考えられるが、線維芽細胞にMyoD1を導入することでも同様に骨格筋細胞への分化が期待できる。線維芽細胞にMyoD1を導入すると、まず線維芽細胞が単核の筋芽細胞へと転換され、筋芽細胞が増殖融合することで多核の筋管細胞となり最終的に筋収縮能を持つこととなる。筋管細胞を培養増殖させることで筋細胞としての機能解析を行うことが可能となるが、本年度は病的素因を持たない線維芽細胞に遺伝子導入を行い筋管細胞を作成する段階まで実現することができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
iPS細胞の作成方法はいくつか報告されているため、従来の方法に則り作成を行うこととし、当大学の他教室で行われているiPS細胞を用いた研究も参考としてiPS細胞を作成するよう計画していたが、作成する際の条件などの問題によりiPS細胞の作成には至らなかった。条件を変更して再検討したが、やはり作成が困難であったため、代替手段としての線維芽細胞を使用した実験を開始した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後も引き続きiPS細胞作成を試みるが、困難である場合は線維芽細胞を使用した実験を並行して進めていく。正常線維芽細胞から筋管細胞への作成は可能となったため、安定した筋管細胞培養の確立と機能解析を次段階の目標とする。正常細胞での機能解析が可能となれば、患者由来の組織を使用して同様の実験系で機能解析を試みる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
物品費が当初の見込みより必要なかったため、次年度以降の物品購入に充てることとした。
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| 次年度使用額の使用計画 |
細胞培養や遺伝子導入、データ解析に必要な物品を購入する予定である。
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