研究実績の概要 |
膀胱癌細胞株T24および同株より樹立したシスプラチン(CDDP)耐性株であるT24RCにおけるmicroRNA200b(以下miR200b)の発現をqRT-PCRを用いて検証した。CDDP耐性株ではmir200bの発現は低下しており、他株でも検証する目的で新規に膀胱癌細胞株EJ138を用いて同様にCDDP耐性株を樹立し検討した。EJ138においてもCDDP耐性株ではmirRNA200bが低下しており関与が示唆された。T24RCに対するmiR200bの強制発現ではCDDPに対して感受性化し、T24においてはノックダウンによりCDDP耐性化が生じた。T24およびEJ138のCDDP耐性株では親株に比してCpGアイランドのメチル化が高いことがバイサルファイトシークエンス法およびパイロシークエンス法により確認され、CDDP耐性株は脱メチル化剤である5-aza-2'-deoxycytidine(5-aza-CdR)処理によりmiR200bの発現が回復した。T24RCにおいて5-aza-CdRがCDDPと相乗的に細胞増殖を抑制することが確認された。また公共データベースであるThe Cancer Genome Atlasを用い、miR200b発現およびmiR200b遺伝子のCpGのメチル化が予後と相関するか検証した。筋層浸潤性膀胱癌症例においてmiR200bの発現が低い群では全生存率が有意に不良であり(p=0.0024, Log-rank test)、高メチル化群でも予後不良であった(p=0.0015, Log-rank test)。またmiR200b発現およびメチル化は逆相関関係にあることが確認できた(R:-0.702,p=1.87e-52)。
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