間葉上皮転換（MET)モデル作製とモデルを用いた生体内MET分子制御機構の解明

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K20189
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 高尾 知佳 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 特任助教 (40612429)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: MET / 間葉-上皮転換 / METモデル

研究実績の概要

間葉-上皮転換(MET)現象は、間葉系細胞が組織浸潤を行い、再度上皮様構造を形成する状況が想定され、生体内では初期段階で生じる重要な現象の一つである。この現象をin vitroまたはin vivoで明らかにするため、上皮細胞特異的なプロモータ―領域を導入したルシフェラーゼ発光及びVenus蛍光蛋白質を同時に発現するレンチウイルスベクターを構築し、MET現象に伴い化学発光を確認できる細胞株を構築した。
本年度は間葉系幹細胞及び不死化子宮内膜間質細胞に導入を行い、培養条件検討によりin vitroで上皮特異的なプロモーターの活性化による化学発光を認める細胞が出現した。また３D培養法や新たに2017年Cellで報告された子宮腺上皮細胞を用いたオルガノイド形成法を用いて、METを再現できないかと研究を進めたが芳しい結果は得られなかった。
In vivo実験として、卵巣移植や腎被膜下移植を用いてマウス生体内に移植を行いIVISにてその発光の検出を試みたが発光は認められず、生体内METモデルの作製は困難を示した。
しかしながら薬剤を用いて間葉系幹細胞を使用したMET誘導実験では一部の薬剤でMET誘導がかかり、蛋白質レベルで間質マーカーであるN-Cadherinの減少や上皮マーカーであるCytokeratinやE-cadherinの発現上昇が認められ、METシグナルを解明する一端になると考えられた。シグナルを明らかにし、MET制御因子を同定するところまでには至れなかったが、今後使用した薬剤のシグナルを検討し、今後の発展につなげたいと考える。

研究成果

• [雑誌論文] The orientation of a decellularized uterine scaffold determines the tissue topology and architecture of the regenerated uterus in rats. (2019)
  • 著者名/発表者名: Miki F, Maruyama T, Miyazaki K, Takao T, Yoshimasa Y, Katakura S, Hihara H, Uchida S, Masuda H, Uchida H, Nagai T, Shibata S, Tanaka M.
  • 雑誌名: Biology of Reproduction 巻: - ページ: in press
  • DOI: 10.1093/biolre/ioz004.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] P2RY is involved in the migration and invasion of human extravillous trophoblast. (2019)
  • 著者名/発表者名: Tetsuo Maruyama, Satomi Katakura, Tomoka Takao, Toru Arase, Yushi Yoshimasa, Shoko Tomisato, Sayaka Uchida, Hirotaka Masuda, Hiroshi Uchida, Mamoru Tanaka
  • 学会等名: Society for Reproductive Investigation 66th Annual Scientific Meeting（SRI2019)
  • 国際学会
• [学会発表] Attempts to establish screening system for identification of drugs targeting human uterine endometrial cancer stem-like cells. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tetsuo Maruyama, Tomoka Takao, Hirotaka Masuda, Fumie Miki, Sayaka Uchida, Hiroshi Uchida, Mamoru Tanaka
  • 学会等名: nternational Society for Stem Cell Research 2018 annual meeting (ISSCR2018)
  • 国際学会
• [学会発表] 子宮内膜幹細胞と上皮間葉転換をターゲットとした非内分泌的な子宮内膜症の新規治療． (2018)
  • 著者名/発表者名: 升田博隆，古谷正敬，丸山哲夫，高尾知佳，内田 浩，内田明花，吉政佑之．片倉慧美，吉村泰典，片渕秀隆，田中 守
  • 学会等名: 第23回日本生殖内分泌学会
• [学会発表] ヒト正常子宮平滑筋細胞に対する子宮筋腫関連遺伝子MED12の変異導入による機能的病因解析． (2018)
  • 著者名/発表者名: 高尾知佳，丸山哲夫，内田 浩，内田明花，三木史恵，片倉慧美，吉政佑之，富里祥子，升田博隆，田中 守
  • 学会等名: 第23回日本生殖内分泌学会
• [学会発表] 子宮体癌細胞の幹様細胞とそれを治療標的とする既存薬の探索． (2018)
  • 著者名/発表者名: 高尾知佳，升田博隆，三木史恵，片倉慧美，吉政佑之，富里祥子，内田明花，内田 浩，田中 守，丸山哲夫
  • 学会等名: 第41回日本分子生物学会
• [学会発表] Extravillous trophoblastの新しいマーカーとしてのG蛋白共役型受容体P2RY14とその細胞浸潤における役割． (2018)
  • 著者名/発表者名: 片倉慧美，丸山哲夫，高尾知佳，瀬田康弘，吉政佑之，富里祥子，三木史恵，内田明花，升田博隆，内田 浩，田中 守，青木大輔
  • 学会等名: 第70回日本産科婦人科学会
• [学会発表] CRISPR/CAS9システムによりMED12変異を導入したヒト子宮筋腫モデルの開発の試み． (2018)
  • 著者名/発表者名: 高尾知佳，丸山哲夫，小野政徳，内田 浩，升田博隆，内田明花，三木史恵，片倉慧美，吉政佑之，藤原 浩，田中 守，青木大輔
  • 学会等名: 第70回日本産科婦人科学会
• [学会発表] Anovel approach to treat emdometriosis via targeting epithelial-mesenchymal transition. (2018)
  • 著者名/発表者名: Hirotaka Masuda, Masataka Furuya, Tetsuo Maruyama, Fumie Miki, Satomi Katakura, Yushi Yoshimasa, Sayaka Uchida, Hiroshi Uchida, Tomoka Takao, Hidetaka Katabuchi, Mamoru Tanaka, Daisuke Aoki
  • 学会等名: 第70回日本産科婦人科学会