| 研究課題/領域番号 |
16K20287
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| 研究機関 | 公益財団法人田附興風会 |
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研究代表者 |
金井 理絵 公益財団法人田附興風会, 医学研究所 第5研究部, 主任研究員 (30574008)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2021-03-31
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| キーワード | 鼓膜 / 組織幹細胞 / 前駆細胞 |
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| 研究実績の概要 |
鼓膜穿孔が閉鎖する過程においては残存鼓膜から鼓膜再生の源となる細胞が供給される必要がある。その役割をになう組織幹細胞または前駆細胞が鼓膜のどこかに存在する可能性が考えられるので、その局在および動態について研究を行っている。
まずはマウスの正常鼓膜や穿孔作成モデルの組織切片を作成し、Keratin5やvimentin、DAPIによって鼓膜の免疫染色をおこなった。鼓膜は上皮層、中間層、粘膜層からなり、その辺縁は鼓膜輪という線維性の組織でできており、外耳道に付着している。Keratin5によって上皮層が染色された。Vimentinでは中間層や、鼓膜輪が骨部外耳道に付着する部分も含めて染色された。細胞成分は鼓膜の中央に存在するツチ骨柄の周囲にも存在してたが、鼓膜輪の周囲に多く存在することがわかった。また、Ki67で染色されるような、turn overの早い細胞も少数だが鼓膜輪の付近に認められ、前駆細胞の候補である可能性が考えられた。
また、Turn overの早い細胞を特定するため、EdUをマウスの腹腔内に投与し、鼓膜にとりこまれるかどうかの研究も行った。しかし、腹腔内投与だけでは鼓膜にEdU陽性細胞は確認できなかった。経口投与、腹腔内投与など複数の経路で複数回の投与が必要である可能性が考えられるが、投与経路や投与回数に関する検討に時間を要し、EdUがとりこまれる細胞の特定には至らなかった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
臨床業務が多忙であったため実験の進捗に遅れがでてしまった。
また、マウスの中耳骨包を摘出し、凍結切片を作成の上、鼓膜の染色を行っているが、鼓膜が薄い組織であるため、その過程で破損、脱落してしまうことがあり、標本および染色に想定よりも時間がかかってしまった。
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| 今後の研究の推進方策 |
鼓膜穿孔モデルを作成し、穿孔が閉鎖するまでの期間（14日間ぐらい）において経時的にsacrificeし、Keratin5, Vimentin, Ki67などにより免疫染色を行い、turn overの早い細胞の局在、量がどのように変化していくかを観察する。
また、ツチ骨柄や鼓膜輪を一部除去すると、鼓膜の再生にどのように影響するか、前駆細胞の動態にどのように影響するかを検討したいと考えている。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
前年度は一昨年に使用していた機器や試薬を用いて実験を行うことができたため、新たな支出が少なく、次年度に繰り越した。次年度には実験動物の購入、試薬の購入、論文発表費用などに使用する予定である。
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