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本研究は、歯髄・象牙質複合体の防御反応のひとつである修復象牙質形成におけるプロテアーゼを起点とした機序を解明し、歯髄保存療法へ応用することを目的としている。
申請者はこれまでの研究から、①ヒト齲蝕罹患歯においてastacinプロテアーゼファミリーに属するBone morphogenetic protein (BMP)-1の発現が修復象牙質形成に伴って亢進すること、②網羅的解析の結果から、BMP-1がヒト歯髄培養細胞の膜タンパク質の糖鎖プロファイリングに変化をもたらし、特にO型糖鎖の発現が亢進する一方で、N型糖鎖の発現は低下すること、を明らかにしている。
前年度までの研究では、BMP-1によって発現が亢進するO型糖鎖の解析を中心に行い、O型糖鎖を付加する糖転移酵素の遺伝子発現の変化をreal-time PCR法にて検索したが、20種類あるアイソザイムのうち有意に発現が亢進するものは確認できなかった。O型糖鎖に特異的に結合するlectinを用いたlectin blottingによる解析ではO型糖鎖の発現がわずかに亢進することを確認し、糖鎖プロファイリングの解析結果が再現された。
本年度は、BMP-1存在下で発現が低下するN型糖鎖についての解析を中心に行った。N型糖鎖に特異的に結合するlectinを用いたlectin blottingによる解析では、N型糖鎖の発現が減少することを確認し、糖鎖プロファイリングの解析結果が再現された。加えて、N型糖鎖のグリコシド結合を特異的に加水分解する酵素処理によってバンドシグナルが減弱することから、実際にバンドの本態がN型糖鎖であることを確認した。
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