| 研究課題/領域番号 |
16K20681
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| 研究機関 | 日本歯科大学 |
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研究代表者 |
五十嵐 寛子 (武内寛子) 日本歯科大学, 生命歯学部, 助教 (30713424)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 喫煙 / 禁煙 / ニコチン / 歯肉線維芽細胞 / 歯根膜線維芽細胞 / 上皮細胞 / 血管内皮細胞 / 線維化 |
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| 研究実績の概要 |
喫煙は歯周病の最大の環境因子リスクファクターといわれる。喫煙者の臨床的所見の一つである歯肉の肥厚に関し、数々の著書などに記載されているものの、有力な研究論文がないことから、申請者は線維化との関係で研究が行われている比較的新しい成長因子であり、当時歯学の分野に焦点を当てた研究が少なかった結合組織増殖因子(Connective Tissue Growth Factor: CCN2/CTGF)に着目し、タバコの有害成分であるnicotineに暴露された歯周組織モデルとして、ヒト歯肉線維芽細胞および歯根膜線維芽細胞を樹立しIn vitro喫煙と歯周組織の線維化について研究を行った。その結果、icotine刺激により増加したCCN2/CTGFによりType I collagenの発現が誘導され線維化へ向かうことを示し、さらに、nicotine刺激によりMMP-1は有意な抑制が認められた一方、TIMP-1は有意な発現の亢進が認められ、さらに、CCN2/CTGFの上流に位置するTGF-β1の有意な増加を示し、恒常性の機能の破たんが生じることを示した。
申請者は歯肉や歯根膜だけではなく、直接nicotineの暴露に直面する上皮細胞や血管内皮細胞の影響、刺激を除去した後の変化についての検索結果を示すことで喫煙の影響および禁煙の効果について患者の理解を向上させることができると考えた。
現段階は、ヒト歯肉線維芽細胞、ヒト歯根膜線維芽細胞、血管内皮細胞および難航していたヒト上皮細胞の分離と樹立を成功させ、nicotineに暴露したモデルによる解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
初年度は、血管内皮細胞および上皮細胞の培養培地の販売中断に伴い約4か月間にもおよぶ実験中断を余儀なくされた。さらに、上皮細胞の分離・樹立が困難であり、やや研究が遅れていたが、ヒト上皮細胞の分離・樹立に成功し実験を進めることができた。2年目の研究のポイントは、nicotine刺激除去によってもたらされる各種細胞変化についての観察である。増殖変化、遊走能、形態変化・アイソトープを用いたnicotineの細胞内動態などの観察を行った。さらに、ヒト血管内皮細胞により三次元培養(Tube Formation)を行い、nicotine刺激後の変化についても観察を行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
喫煙・禁煙についての形態学的変化や細胞増殖活性について検索を行ってきた。今後は、各種のタンパク質の遺伝子発現や分泌測定を行うこととする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
タンパク解析を行う試薬を未購入のため。
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