| 研究課題/領域番号 |
16K20871
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
野川 奈津子 北海道大学, 大学病院, 医員 (80757360)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | PCFT / SLC46A1 / HFM / deep intronic mutation |
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| 研究実績の概要 |
葉酸はDNA合成、アミノ酸合成に必須の補酵素であり、欠乏により巨赤芽球性貧血、免疫不全症状、神経症状などを来す。妊婦で葉酸が欠乏すると、胎児の神経 管形成障害リスクが上昇する。この葉酸を先天的に吸収できない遺伝性葉酸吸収不全症（Hereditary folate malabsorption,HEM）は1961年初報告され、2014年 現在全世界で31の報告がある。 2014年に申請者らは、本邦となるHFM患者について報告した。その患児について、申請者らは葉酸輸送体proton-coupled folate transporter (PCFT)のコード遺 伝子SLC46A1に未報告の変異があることを発見した。当該患児は重症免疫不全症症、神経症状を有していた。過去の報告によれば、後遺症なく治療が奏効した例 は殆どない。本研究の目的は、当該遺伝子変異について機能解析を進め、遺伝性葉酸吸収不全症に対する有効な治療基準を確立することである。 我々が報告した遺伝性葉酸吸収不全症患児の遺伝子変異のうち、ひとつは重要なアミノ酸置換を生じることが過去の報告で予測されており、SNPとして登録のな い重要な変異である。一方のdeep intronic mutationについては、通常転写されるエクソンと距離のあるイントロン部位での新規変異であり、転写以降の過程に 及ぼす影響は不明である。 申請者らは平成28年度中、PCR法により、患児の葉酸吸収不全が、両親由来の遺伝子変異が組み合わせられたことによることを確認した。また、平成29年度中、患児由来EBV-LCLを樹立し、血球系へのPCFT loss-of-functionの影響の有無の検討を行った。平成30年度中、新報告症例も加え、更なる機能解析を行った。平成31年度は、これまでのデータをまとめ、論文執筆を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成31年度は、樹立した患児由来EBV-LCLを葉酸濃度勾配下で一定時間培養し、細胞周期解析でS期停滞が生じているかを確認する予定であった。また、患児と同等の変異を有した神経系細胞株を用いて髄液中の必要濃度の検索を行い、解析をさらに進め、学術論文投稿、学会発表を予定していた。実際には、細胞周期解析や髄液中の濃度検索には至らなかったが、HeLa細胞のPCFT発現解析やMTX-FITCを用いた変異PCFTの葉酸取り込み能の解析を行うことができた。研究内容に変更は生じたものの、論文投稿まで進んだという点で、概ね順調に進展していると言える。
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| 今後の研究の推進方策 |
2021年現在、世界で35例の報告という非常に稀と考えられていたHFMだが、今回日本人の非血縁4家系でいずれも両親由来の複合ヘテロ変異が示され、潜在的な患者や保因者が多くいる可能性がある。今後も一層の患者情報集積と検討を行いながら、学会発表の準備を進めていく予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究は概ね順調に進行しており、2020年度予定の学会発表にむけ準備を行っていた。しかし、コロナウイルスの影響で予定していた学会が中止になり、当該学会での発表は断念した。再度発表の機会をうかがい、次年度使用額を充てる予定である。
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