フィブリノーゲン型腎アミロイドーシスの分子病態解明と診断・新規治療法開発への応用

2018 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 16K21066
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 吉長 恒明 信州大学, 学術研究院医学系(医学部附属病院), 助教 (30770226)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2019-03-31
• キーワード: フィブリノーゲン型アミロイドーシス

研究実績の概要

FibrinogenAα鎖遺伝子の4899_4902delAGTG変異が挿入されたヒト型fibrionogenを産生するChinese Hamster Ovary(CHO)細胞の検体を用いて解析を行った。細胞培養の途中で採取される培養上清(細胞外成分)とCHO細胞自体を破壊して採取される細胞破砕液（細胞内成分）を用いて比較検討の方法をとった。これらの溶液内の異常Aα部位の検出を最優先とし、まず細胞破砕液においてSDS-PAGEをし、通常のCBB染色と免疫沈降法（抗フィブリノーゲン抗体）を用いて実験を施行したが、数か所の陽性バンド部位からゲルを切りとり、質量分析計にかけたがAα鎖自体が検出されなかった。次に抗Fibrinogen抗体と抗Aα鎖抗体を用いて上清と細胞破砕液を用い、プロテインAセファロースを用いたところ、同じく検出できなかった。次に以前施行されたWestern blotの陽性部位と照らし合わせ（陽性バンドと異なる分子量の位置）、陽性バンド以外を狙ってAα検出部位をバンド上で同定することができた。質量分析の結果得られたペプチドは正常Aα鎖で600の末端近くまで検出されるが、異常Aα鎖では475近傍までのみであり、その後は検出されなかった。生成された蛋白は正常型に比べ、より不安定で分解しやすいことが質量分析結果からも推測された。この変異Aα鎖の断端がゲルのより分子量の小さいところに流れていないかde novoシークエンス（ペプチドの一部のみでも推測する方法）を用いておこなったが、変異ペプチドの断端は得られなかった。MALDI-TOFでの解析は免疫沈降法の後、検出する予定だが、目標分子量の設定がうまくいかず、まだ実験結果が得られなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Late-onset Transthyretin (TTR)-familial Amyloid Polyneuropathy (FAP) with a Long Disease Duration from Non-endemic Areas in Japan (2019)
  • 著者名/発表者名: Miyake Z, Nakamagoe K, Ezawa N, Yoshinaga T, Hashimoto R, Sato T, Sekijima Y, Tamada A
  • 雑誌名: Internal Medicine 巻: 58 ページ: 713-719
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.1457-18
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Monitoring treatment response to tafamidis by serialnative T1 and extracellular volume in transthyretinamyloid cardiomyopathy (2019)
  • 著者名/発表者名: Shintani Y, Okada A, Morita Y, Hamatani Y, Amano M, Takahama H, Amaki M, Hasegawa T, Ohta-Ogo K, Kanzaki H, Ishibashi-Ueda H, Yasuda S Shimazaki C, Yoshinaga T, Yazaki M, Sekijima Y, Izumi C
  • 雑誌名: ESC Heart Failure 巻: 6 ページ: 232-236
  • DOI: 10.1002/ehf2.12382
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel CACNA1A nonsense variant in a patient presenting with paroxysmal exertion-induced dyskinesia (2019)
  • 著者名/発表者名: Ogawa Y, Nakamura K, Ezawa N, Yamaguchi T, Yoshinaga T, Miyazaki D, Kosho T, Sekijima Y
  • 雑誌名: J Neurol Sci 巻: 399 ページ: 214-216
  • DOI: doi: 10.2169/internalmedicine.1457-18
• [学会発表] 本邦初の遺伝性アミロイドーシス患者の同定：Lasermicrodissection(LMD)を用いたアミロイド蛋白解析の有効性 (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉長 恒明, 加藤 修明 , 矢崎 正英, 関島 良樹
  • 学会等名: 第115回日本内科学会総会
• [学会発表] ドミノ移植後レシピエントにおける医原性アミロイドーシスの臨床病理学的検討（第2報） (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉長 恒明, 矢崎 正英, 亀谷 富由樹, 関島 良樹
  • 学会等名: 第59回日本神経学会学術集会
• [学会発表] 肝腎精巣アミロイドーシスを呈した遺伝性AApoA1 型アミロイドーシスの一例 (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉長恒明、加藤修明、上野賢一、佐藤充人、矢崎正英、亀谷富由樹、安田日出夫、渡邉恭平、関島良樹
  • 学会等名: 第142回信越地方会
• [学会発表] 消化管アミロイドーマ患者から同定した野生型シスタチンC型アミロイドーシス(第2報) (2018)
  • 著者名/発表者名: 吉長恒明、矢崎正英、上原剛、亀谷富由樹、小松修、関島良樹
  • 学会等名: 第6回日本アミロイドーシス研究会