| 研究課題/領域番号 |
16K21631
|
|---|
| 研究機関 | 国立研究開発法人理化学研究所 |
|---|
研究代表者 |
大竹 和正 国立研究開発法人理化学研究所, ライフサイエンス技術基盤研究センター, 研究員 (80593631)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2018-03-31
|
| キーワード | 応用生物化学 / 酵素化学 / バイオテクノロジー / タンパク質工学 / 非天然型アミノ酸 |
|---|
| 研究実績の概要 |
申請者らは大腸菌翻訳終結因子1遺伝子破壊株を初めとする大腸菌遺伝暗号改変株の開発を行って来た。この成果として、以前には不可能であったタンパク質中の部位特異的多数箇所への非天然型アミノ酸導入を可能とすると共に、複数種類の非天然型アミノ酸及び類似体の導入へと繋がる基礎的成果を得た。本申請課題では、実際に複数種類の非天然型アミノ酸を同一のポリペプチド鎖中に同時に導入出来る大腸菌株の開発を行い、ハロゲン化チロシンにより安定化したタンパク質をα-ヒドロキシ酸によるプロ配列の除去を利用して生産する系を確立する。
これまでに、tRNAとアミノアシルtRNA合成酵素の改変や発現系、アルカリ処理条件の最適化を行いAGGコドンへのα-ヒドロキシ酸導入と比較的穏和な条件での非酵素的切断を可能とした。この系とAGGコドン再定義株を用いてAGGコドンへα-ヒドロキシ酸を、UAGコドンへハロゲン化チロシンをそれぞれ部位特異的導入する手法の開発に成功した。トランスグルタミナーゼ(TG)中のチロシン部位にハロゲン化チロシンを導入することにより安定化したTGを取得した。実際にα-ヒドロキシ酸とハロゲン化チロシンのTGへの同時導入により、非酵素的に活性化可能な安定化TGが生産できることを示している。
非天然型アミノ酸を用いたタンパク質工学は、従来の進化工学的手法とは異なる新しいアプローチであると同時に併用も可能である。この強力な手法をより幅広く展開可能にすることを目指したい。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
研究計画の一部見直しを行い、その結果当該年度に行う予定であった一部研究内容の遂行を見送り、翌年度の研究計画の一部を当該年度に前倒しして進行した。
全体として研究の進行は順調であり、研究期間内における目的達成向けた見通しを立てることに成功した。
|
| 今後の研究の推進方策 |
前年度から引き続き研究を遂行し、論文投稿に向けたデータ収集を行うと共に、より使いやすく汎用性の高い系へと改良しさらなる応用展開へと道を拓きたい。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
研究計画の一部変更に伴い購入を予定していた物品の一部の購入を見合わせた。また、消耗品の一部について次年度以降の購入が適当であると判断したため。
|
| 次年度使用額の使用計画 |
次年度分として予定していた消耗品の購入に加え、前年度に購入を見送った消耗品の購入を行う。応用展開を目指すにあたり消耗品の購入額が大きくなることが予想される。
|
