ポリコーム標的遺伝子Glis2による白血病幹細胞の分化制御機構の解明

2016 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 16K21646
• 研究機関: 国立研究開発法人国立がん研究センター
• 研究代表者: 高松 絵美 (市原絵美) 国立研究開発法人国立がん研究センター, 研究所, 特任研究員 (80771592)
• 研究期間 (年度): 2016-04-01 – 2018-03-31
• キーワード: AML / Ring1A/B / Glis2

研究実績の概要

これまでの研究において、ポリコーム抑制複合体構成因子Ring1A/BがMOZ-TIF2白血病の幹細胞の維持に重要であることを明らかにし、またRing1A/Bによって発現が抑制されているターゲット遺伝子としてGlis2を同定していた。
今回、Ring1A/Bによる白血病幹細胞維持におけるGlis2の重要性を明らかにするために、Ring1A/Bを欠損させてもGlis2遺伝子が抑制解除されないRing1A/B, Glis2トリプルKOマウス（Ring1A-/-, Ring1Bf/f, Glis2f/f, ERT2Cre）を作成した。Ring1A/B, Glis2トリプルKOマウスBMのcKit陽性細胞に融合遺伝子MOZ-TIFを導入することで作成した白血病細胞を用いてコロニーアッセイやマウスへの移植実験等を行った。比較対象としてはRing1A/BダブルノックアウトマウスBMのcKit陽性細胞から作成した白血病細胞を用いた。Ring1A/Bのみの欠損ではコロニー形成能が完全に消失したが、Glis2を同時に欠損させることでコロニー形成が部分的に回復した。ギムザ染色では、Ring1A/B欠損で消失した未熟な形態を示す細胞がGlis2の同時欠損下では維持されていた。マウスBM細胞の白血病幹細胞分画の解析では、Ring1A/Bの欠損により劇的に減少したL-GMP分画がGlis2の同時欠損では維持されていた。以上の結果から、Ring1A/BはGlis2の発現抑制を介して白血病幹細胞の未分化性を維持していることが示された。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初の計画通り、Ring1A/B, Glis2トリプルKOマウスを作成し、Ring1A/BダブルKOとの比較を行うことで、Ring1A/Bによる白血病幹細胞維持においてGlis2が分化抑制を担う重要なターゲット遺伝子であることを明らかにした。Glis2による分化制御の分子メカニズムについても、Glis2を過剰発現させた白血病細胞を用いてマイクロアレイ解析を行うなど、下流のターゲット因子の同定に向けて現在進行中である。したがって、研究はおおむね順調に進展していると判断される。

今後の研究の推進方策

Glis2による白血病細胞の分化誘導の分子メカニズム明らかにするために、Glis2が発現制御するターゲット因子についての解析を進める。さらに、正常の造血細胞におけるGlis2の機能解析も行い、白血病細胞と正常造血細胞における機能の違いを明らかにする。

次年度使用額が生じた理由

物品の価格変更等により当初の使用計画通りにはいかなかった。

次年度使用額の使用計画

次年度の物品費として使用することとする。

研究成果

• [学会発表] RING1A/BとEZH1/2は急性骨髄性白血病の幹細胞を根絶させるための有望な治療標的である (2016)
  • 著者名/発表者名: 高松（市原）絵美、 藤田修平、 嶋晴子、 本間大輔、 安達宣明、 岩間厚志、 古関明彦、 荒木一司、 北林一生
  • 学会等名: 第75回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（横浜市）
  • 年月日: 2016-10-06 – 2016-10-08
  • 招待講演
• [学会発表] The roles of Glis2 in leukemic and hematopoietic stem cells (2016)
  • 著者名/発表者名: E. Takamatsu-Ichihara, H. Shima, K. Yamagata, S. Fujita, Y. Aikawa, I. Kitabayashi
  • 学会等名: The 5th JCA-AACR Special Joint Conference
  • 発表場所: 東京ベイ舞浜ホテルクラブリゾート（浦安市）
  • 年月日: 2016-07-13 – 2016-07-15
  • 国際学会