研究課題/領域番号 |
16KT0195
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研究機関 | 近畿大学 |
研究代表者 |
北松 瑞生 近畿大学, 理工学部, 講師 (60379716)
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研究分担者 |
大槻 高史 岡山大学, 自然科学研究科, 教授 (80321735)
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研究期間 (年度) |
2016-07-19 – 2019-03-31
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キーワード | ペプチド / ペプチド核酸 / 細胞内運搬ペプチド / 蛍光色素 |
研究実績の概要 |
我々はペプチド核酸の両端に蛍光基と消光基を修飾したペプチド核酸ビーコンを細胞内に自発的に運搬させることによって、細胞内でのマイクロRNA検出を可能にする方法を開発することを目的としている。このペプチド核酸ビーコンを細胞内に運搬するために、本研究ではペプチド核酸ビーコンの末端に細胞内運搬ペプチドを連結させる。 本年度は計画通り、蛍光基としてフルオレセイン(Fam)基および消光基としてダブシル基をもつペプチド核酸ビーコンの合成を進めた。しかし合成途中でダブシル基が分解し、十分な消光が生じなかったため分子設計を変更した。具体的には、ベンズアクドニル(Bacd)基とアクドニル(Acd)基とを蛍光基と消光基との代わりに用いたペプチド核酸ビーコンを合成した。このペプチド核酸ビーコンはHPLCおよび質量分析計により同定した。 このペプチド核酸ビーコンは、RNAと相互作用する前は、ペプチド核酸ビーコンの両端側にあるグルタミン酸とリジンとによって折りたたまれているが、その数を1対、2対、3対と増やしていくごとに、RNAとの相互作用した後に生じる蛍光発光の変化が大きくなることを明らかにした。この結果により本研究のペプチド核酸ビーコンが細胞内のマイクロRNA検出に利用することが可能になった。 さらにこのペプチド核酸ビーコンに細胞内運搬ペプチドをジスルフィド結合を通じて連結させることに成功した。このペプチド核酸ビーコン-細胞内運搬ペプチド 連結体はHPLCおよび質量分析計により同定した。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初予定した蛍光基および消光基を使用することができなかったが、新しい蛍光色素の組み合わせ(Acd基とBacd基)によりペプチド核酸ビーコンがうまく作用できるようになった。
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今後の研究の推進方策 |
上記の新設計のペプチド核酸ビーコンを用いて、当該年度の計画通り、細胞内でのマイクロRNA検出に着手する。
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次年度使用額が生じた理由 |
ペプチド核酸ビーコン-細胞内運搬ペプチド 連結体の合成が当初計画していたものより遅れが生じたため、細胞実験に影響がでた。
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次年度使用額の使用計画 |
次年度に予定通り細胞実験に取り掛かる。
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