| 研究課題/領域番号 |
17013053
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
花岡 文雄 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 教授 (50012670)
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| 研究分担者 |
横井 雅幸 大阪大学, 大学院・生命機能研究科, 助教 (00322701)
岩井 成憲 大阪大学, 大学院・基礎工学研究科, 教授 (10168544)
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| キーワード | がん / 遺伝子 / ゲノム / DNAポリメラーゼ / ユビキチン |
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| 研究概要 |
研究代表者らは、損傷乗り越え複製(translesion synthesis:TLS)機構を総合的に理解し、その発がんおよび発がん防御における役割を明らかにすることを目的として、以下に述べる研究を行った。
1.これまでの研究から、PolηとREV1との相互作用にはPolη分子上のフェニルアラニン(F)が2個連続している2ヶ所が重要であることが分かったので、これらのFFをAAに変異させたPolηをXP-V細胞に導入し、相互作用の生理的意義を調べた。この変異Polηを発現するXP-V細胞は、紫外線感受性や紫外線誘発突然変異率は野生型細胞と同じであったが、自然突然変異率は有意に高く、酸化的損傷などのTLSにREV1が関与していることが示唆された。
2.ヒト細胞においてPCNAのK164のモノユビキチンが複製ポリメラーゼとTLSポリメラーゼとのスイッチングに関与していることが示唆されている。そこで内在性PCNAの発現をsiRNAによって抑制し、その細胞にsiRNA耐性の野生型PCNA(PCNAres)またはsiRNA耐性でかつK164をアルギニンに変えたPCNA(PCNA[K164R]res)を発現させ、細胞由来のPCNAを外来のPCNAに置き換えた。これらの細胞の紫外線感受性を調べたところ、PCNA[K164R]res発現細胞は高い感受性を示し、PCNA K164の翻訳後修飾が紫外線抵抗性に必須であることが示された。
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