染色体安定性と発がん抑制に関わるファンコニ貧血原因遺伝子群の機能解析

2009 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17013083
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 高田 穣 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (30281728)
• 研究分担者: 冨田 純也 京都大学, 放射線生物研究センター, 研究員 (50511367)
• キーワード: DNA修復 / シスプラチン / ファンコニ貧血 / FANCD2 / FANCI / モノユビキチン化

研究概要

ファンコニ貧血(FA)は好発がん性、骨髄不全などを示す遺伝性疾患で、細胞レベルでは、染色体不安定性と、マイトマイシンC (MMC)などのDNAクロスリンカー剤に対する高感受性が特徴的である。これまでに13の原因遺伝子(FancA/B/C/D1/D2/E/F/G/I/J/L/M/N)が同定された。FA経路によるDNA修復には、多数の遺伝子産物から構成されるコア複合体により、FANCI/FANCD2複合体がモノユビキチン化されることが必須である。その後、FANCI/FANCD2複合体はクロマチン移行してフォーカス形成し、DNA修復を行う。
1. FANCD2コンディショナル細胞を作成し、それをもとにしてFANCIとダブルノックアウト細胞の作成を行った。シスプラチンなどの感受性から判断して、両者はDNA修復においてエピスタシスを示すと判断された。この細胞にGFP、RFPとそれぞれ融合したFANCD2、FANCIを発現させたところ予想通り高度な共局在を示した。FANCD2のユビキチンとの融合タンパクを発現させても、クロマチンに移行せずDNA修復も回復せず、FANCIはFANCD2のクロマチン移行にも機能していることがわかった。さらにFANCI機能の検討を進めている。
2. 早稲田大学の胡桃坂博士らと共同で、FANCD2のヒストンシャペロン活性とのDNA損傷修復との関係を調べた。多数のFANCD2C末とランケーション変異体を作成し、ヒストンシャペロン活性を完全に失ったFANCD2変異体同定した。この変異体は、ヒストンH2Bとの融合によってもDNA修復を行うことができず、シャペロン活性とDNA修復との関係が強く示唆される。今後さらに検討をすすめ、FANCD2の本質的な機能に迫りたい。

研究成果

• [雑誌論文] The Fanconi anemia pathway : Insights from somatic cell genetics using DT40 cell line. (2009)
  • 著者名/発表者名: Takata M, Ishiai M, Kitao H
  • 雑誌名: Mutat Res 668 ページ: 92-102
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chemopreventive effects of gefitinib on nonsmoking-related lung tumori genesis in activating epidermal growth factor receptor transgenic mice (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohashi K, Takigawa N, Osawa M, Ichihara E, Takeda H, Kubo T, Hirano S, Yoshino T, Takata M, Tanimoto M, Kiura K.
  • 雑誌名: Can Res 69 ページ: 7088-7095
  • 査読あり
• [学会発表] 高発がん遺伝病ファンコニ貧血の分子メカニズム (2009)
  • 著者名/発表者名: 高田穣
  • 学会等名: 第71回日本血液学会学術集会シンポジウム「小児血液腫瘍の発症リスクと先天異常」
  • 発表場所: 京都市国際会館
  • 年月日: 20091223-20091025
• [学会発表] DNA damage signaling in the Fanconi anemia pathogenesis (2009)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata
  • 学会等名: 第51回小児血液学会血液プレジデンシャルシンポジウム「DNA damage response and hematological disorder」
  • 発表場所: 千葉東京ベイホテル東急
  • 年月日: 20091127-20091129
• [学会発表] REGULATION OF CROSS-LINK REPAIR THROUGH THE FANCONI ANEMIA PATHWAY. (2009)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata, Junya Tomida, Akiko Itaya, Tomoko Shigechi, Masamichi Ishiai
  • 学会等名: The Fortieth International Symposium of the Princess Takamatsu Cancer Research Fund
  • 発表場所: Tokyo
  • 年月日: 20091110-20091112
• [学会発表] A novel role of the FA core complex in FANCI phosphorylation, an important switch in the FA pathway. (2009)
  • 著者名/発表者名: Minoru Takata, Junya Tomida, Tomoko Shigechi, Hiroyuki Kitao, Akiko Itaya, Masamichilshiai
  • 学会等名: Twenty-first Annual Fanconi Anemia Research Fund Scientific Symposium
  • 発表場所: Baltimore, MA, USA
  • 年月日: 20091001-20091004
• [備考]
  • URL: http://www.rbc.kyoto-u.ac.jp/Late_Effect/Site_1/Welcome,html