| 研究概要 |
【目的】
我々はこれまで、拡大内視鏡を用いてヒトのaberrant crypt foci(以下ACF)を観察し、ACFがadenoma-carcinoma sequenceのprecursorであること、ACFには既にK-ras変異が高率に認められることを報告した(New Engl J Med 339, 1998)。ACFは腺腫の前病変であることから、ACFを標的とした発癌予防の臨床試験を行うことにより、短期間にかつ安全に予防効果を評価しうると考えられる。本年度は、まずACFにおける種々の遺伝子異常の解析を行った。
【方法と結果】
(1)ACFの観察
大腸ポリープ患者のポリープ及びACFを用いた。
(2)K-ras変異の解析
ACF及びポリープをmicrodisectionした後、DNAを抽出した。2-step PCR-RFLP法によりK-rasの点突然変異を検討したところ、ACFでは81%(34/42)、ポリープでは65%(20/31)に変異を認めた。
(3)APC変異の解析
In vitro synthesized protein assayによりAPC変異を検討したところ、ACFではいずれも変異を認めなかったが(0/15)、ポリープでは80%(8/10)に変異を認めた。
(4)β-catenin及びCOX-2の発現
β-catenin及びCOX-2に対するモノクローンナル抗体を用い、ABC法により免疫組織染色を行った。その結果、ACFではβ-cateninの発現は認められなかったが(0/21)、ポリープでは75%(9/12)に認められた。また、COX-2はACFにおいて発現を認めなかったが、ポリープでは80%(8/10)に発現を認めた。
(5)MSI
キャピラリーゲルを用いたPCR SSCP法により6領域のMSIを検討した。ACFではいずれもMSI-Hを認められなかったが、ポリープでは15%にMSI-Hを認めた。
【結論】
ACFは、K-ras変異が高率に陽性であるが、他の遺伝子異常はないか、あっても低率であるこあが明らかとなった。
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