| 研究課題/領域番号 |
17054004
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
深水 昭吉 筑波大学, 大学院・生命環境科学研究科, 教授 (60199172)
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| 研究分担者 |
大徳 浩照 筑波大学, 大学院・生命環境科学研究科, 講師 (30361314)
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| キーワード | フォークヘッド / アレルギンメチル化 / 複合体精製 / 酸化ストレス / ユビキチン化 / E3リガーゼ / 修復 / 複製 |
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| 研究概要 |
申請者らの研究から、Foxo1がDNA損傷を修復する多数の因子群と複合体を形成していることが判明し、Foxo1のDNA修復への関与が示唆された。DNAの損傷・修復と寿命・老化現象との関連性は既に指摘されていることから、申請者らはDNA損傷・修復系とFoxo1について注目して、以下の計画を実施した。
・Foxo1がDNA損傷修復機構に関与する可能性の検証 : RNAi法によりFoxo1をノックダウンした細胞にUV照射を行い、対照区と比べて死細胞の数が劇的に増加することをTUNEL assayによって評価した。
・UV照射がFoxo1複合体へ与える影響 : UV刺激を含む各種DNA損傷条件下においては、Foxo1とDNA修復因子との結合に変化が起きている可能性を共免疫沈降、GST pull-downおよびFoxo1複合体のグリセロール密度勾配遠心法による複合体分離法を用いて、予備検討を行った。
・FoxolとDNA修復因子の結合に関する検討 : Foxo1とDNA修復因子が結合するのはDNA上なのか否かをChIP assayおよびReChIP assayを用いての予備検討を行った。
・DNA損傷時のFoxo1翻訳後修飾状態の解析 : 当研究室で作製しているFoxo1の各種翻訳後修飾特異的認識抗体を用いて、UV照射時におけるFoxo1の翻訳後修飾状態を解析した。
・複合体関連因子の精製 : SMEK1等の複合体を精製し、結合因子を同定した。
・DNA損傷時におけるFoxo1修飾状態の各アミノ酸レベルでの詳細な検討 : UV照射やインスリンなど様々な刺激で変化するFoxo1の修飾状態と複合体構成因子との関連性を予備精査した。特に、線虫を用いた修飾アミノ酸を詳細に分析する予備検討を行った。
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