| 研究概要 |
1. ヒトTFIIEの構造機能解析
ヒトTFIIEβサブユニットの中央にあるフォークヘッドドメイン(アミノ酸66-146番目)の機能解析を進めたところ、この領域の球状構造を保持するのに重要な疎水性アミノ酸残基(Val77, Leu78, Ile102, Ile111)と3個の塩基性残基(Lys129, Lys140, Lys142)がこの領域の転写活性に重要であることが明らかになった。機能的な面からは後者の塩基性領域が重要と考えさらに解析を進めたところ、2本鎖DNA結合活性が最もこの領域の機能として重要性を持っていることを明らかにした(Tanaka, et.al., Genes Cells, 2009)。
2. ヒトTFIIEとRNAポリメラーゼII(Pol II)の相互作用の解析
TFIIEは、αサブユニットがPolIIのRpb5サブユニット、RサブユニットがRpb2とRpb12に強く結合する。今年度はTFIIEのサブユニットのどの領域に各々のPolIIサブユニットが結合するかを解析した。その結果、TFIIEαはN末のフォークヘッドドメインでRpb5と結合し、またTFIIEβはC末半分に位置するbHLH領域付近でRpb12、Rpb2と隣り合って結合するらしいことを示すことができた。
3. メディエーター複合体の解析
核内シグナル伝達に関わるメディエーターは、約30サブユニットからなる巨大複合体である。この複合体はヘッド、ミドル、テイル、CDK/Cycの4サブ領域から構成されることが明らかになった。その中でテイル領域に位置するヒトのMED15サブユニットは酵母のガラクトース代謝に関わる転写制御タンパクとして見出されていたGal11のオーソログであることが明らかにされているが、これがTFIIEと結合することを明らかにした。さらにはTFIIEαがMED15のN末にあるKIXドメインと結合することを示した。
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