G蛋白質シグナルによる物質輸送ダイナミズムのバイオイメージング解析

2008 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17079009
• 研究機関: 国立循環器病センター(研究所)
• 研究代表者: 望月 直樹 国立循環器病センター(研究所), 循環器形態部, 部長 (30311426)
• 研究分担者: 福原 茂朋 国立循環器病センター研究所, 循環器形態部, 室長 (70332880) ; 増田 道隆 国立循環器病センター研究所, 循環器形態部, 室長 (00190364) ; 川原 敦雄 国立循環器病センター研究所, 循環器形態部, 室長 (10362518) ; 三浦 浩一 国立循環器病センター研究所, 循環器形態部, 室長 (20360349)
• キーワード: 低分子量 / 情報伝達 / 輸送 / ミオシン

研究概要

昨年までにエンドゾームからのVE-cadherinの細胞間接着部位への輸送が、cAMP-Epac-Raplを海する系で促進されること、またRap1の活性化に引き続くRac1の活性化による細胞膜の伸展が、VE-cadherinの輸送を促進することを明かにした。これはFKBP-FRBを用いたiRAPシステムにより細胞膜でRap1の活性化を誘導した時にも観察されることから、Rap1の細胞内部での活性化でも細胞膜での活性化でもいずれも、細胞膜を伸展させる結果になれば、細胞は内部から膜構成成分を輸送開始する仕組みがあることを示唆する結果となった。
さらにVE-cadherinの細胞膜での安定化機構をイメージングによって明かにする目的でVe-cadherinのFRAP (Fluorescence Recovery after Bleeching)実験を行った。 VE-cadherin-GFPが、刺激のない培養条件では90%近くがmobile fractionであるのに対して、cAMPでは70%がmobile fractionになることからcAMPがVE-cadhreinのダイナミズムをresetさせて、より安定化VE-cadherin接着を起こしていることもわかった。さらにVE-cadherinの細胞内ドメインがVE-cadherinの輸送(ダイナミズム)に重要であることを細胞内欠失変異体や、PECAM-1との細胞内ドメインスイッチ変異体を作製して明かにすることができた。

研究成果

• [雑誌論文] Differential function of Tie2 at cell-cell contacts and cell-substratum contacts regulated by angiopoietin-1. (2008)
  • 著者名/発表者名: Fukuhara S
  • 雑誌名: Nat. Cell Biol. 10 ページ: 513-526
  • 査読あり
• [雑誌論文] Interaction of scaffolding adaptor protein Gab1 with tyrosine phosphatase SHP2 negatively regulates IGF-I-dependent myogenic differentiation via the ERK1/2 signaling pathway. (2008)
  • 著者名/発表者名: Koyama T
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 283 ページ: 24234-24244
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spatial and temporal role of the apelin/APJ system in the caliber size regulation of blood vessels during angiogenesis. (2008)
  • 著者名/発表者名: Kidoya H
  • 雑誌名: EMBO J. 27 ページ: 522-534
  • 査読あり
• [雑誌論文] Conformational switch of angiotensin II type l receptor underlying mechanical stress-induced activation. (2008)
  • 著者名/発表者名: Yasuda N
  • 雑誌名: EMBO Rep 9 ページ: 179-186
  • 査読あり
• [雑誌論文] 15-lipoxygenase-1 in the vasculature : expanding roles in angiogenesis. (2008)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki N
  • 雑誌名: Circ. Res. 102 ページ: 143-145
  • 査読あり
• [雑誌論文] Single Common Mutation in the Cardiac Sodium Channel Gene SCN5A with Diverse Clinical Phenotypes. (2008)
  • 著者名/発表者名: Makita N
  • 雑誌名: J. Clin. Invest. 118 ページ: 2219-2229
  • 査読あり