| 研究課題/領域番号 |
17080013
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| 研究機関 | 国立がんセンター(研究所及び東病院臨床開発センター) |
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研究代表者 |
藤田 雅俊 国立がんセンター(研究所及び東病院臨床開発センター), ウイルス部, 室長 (30270713)
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| 研究分担者 |
西谷 秀男 兵庫県立大学, 大学院・生命理学研究所, 教授 (40253455)
水野 武 独立行政法人理化学研究所, 今本細胞核機能研究室, 専任研究員 (30281629)
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| キーワード | 染色体DNA複製 / 細胞周期制御 / CDC6 / 複製チェックポイント / ORC / Cdt1 / ATR / タンパク質分解制御 |
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| 研究概要 |
Cdt1はORC/CDC6と共に、複製ヘリカーゼMCMの染色体loadingを行っている。S期以降は再複製防止のためこれらの機能は抑制され、特にCdt1は複数の機構により厳密に制御されている(藤田、西谷)。さらに、Cdt1はG1/G0期にはAPC/C^<Cdh1>ユビキチンリガーゼによる制御を受けている(藤田)。その厳密な制御から予想されるCdt1の強いMCM loading能には、新規結合蛋白であるtopoisomerase、SNF2、及びGRWD1(新規ヒストン結合性WD-repeat蛋白質)が関与していることが明らかとなりつつある(藤田)。Cdt1制御は中心的ではあるが、正常ヒト細胞においてはその脱制御のみでは再複製は起こらず、少なくともCdt1とORC1あるいはCDC6の脱制御が必要である事を明らかにした(藤田)。このことからも、ライセンシング制御の重要性が一層明らかとなった。加えて藤田は、CDC6がATRと相互作用し複製チェックポイント制御にも関与している事を示した。西谷は、CDKインヒビターp21もCdt1と同様にPCNA依存的にCu14-DDB1^<Cdt2>により分解されることを明らかにした。組換えCu14-DDB1^<Cdt2>複合体を精製し、Cdt1とp21のin vitroユビキチン化系を確立した。さらに、Cdt1の分解にはPCNA結合部位に加えて周辺配列も必要であることが判った。水野は、ほ乳動物細胞の複製前複合体の試験管内再構成に取り組んでいる。その一環として、マウスORC1-5を安定に大腸菌から精製するためにORC1およびORC2のN末を削り大量調製した。ORC2-5複合体とN末欠失ORC1-5複合体が持つDNA結合活性を調べた所、N末欠失ORC複合体は一本鎖あるいは二本鎖DNAのみならず、DNAバブル構造に高い親和性を有することが判った。また、バキュロウイルスでのORC精製も行っている。
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