薬物トランスポートソームの機能とその制御機構の解析

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17081006
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 鈴木 洋史 東京大学, 医学部附属病院, 教授 (80206523)
• 研究分担者: 杉山 雄一 東京大学, 薬学系研究科, 教授 (80090471) ; 伊藤 晃成 東京大学, 医学部附属病院, 助教授 (30323405) ; 菅原 寧彦 東京大学, 医学部附属病院, 助教授 (90313155)
• キーワード: ABCC / MRP2 / 酸化的ストレス / 内在化 / 胆汁排泄 / プロテインキナーゼ / ABCB11 / BSEP

研究概要

本研究では特に肝臓の胆管側の輸送体(ABCB11,ABCC2(MRP2),ABCC4の膜局在や活性を制御する細胞質蛋白質の同定、これら機能ユニットの制御に関わるシグナル経路の解明を目指している。本年度は特に酸化ストレスによるMRP2の内在化のシグナル経路を明らかにした。特に細胞内GSHの減少にともなって細胞内のフリーCaが上昇すること、この後にNOが発生すること、さらに最終的にPKCファミリーのうちCa依存性、ジアシルグリセロール非依存性PKC、すなわちnovel PKC(nPKC)が関与することを明らかとした。また別個にMrp2のリン酸化と活性制御に関しては、vitroで強制的にMrp2をPKCαでリン酸化するとin vivoの現象と逆に輸送活性が増加することより、in vivoにおいてPKCはMrp2の活性増大よりむしろその内在化制御に関わる可能性を支持する結果を得た。以上を踏まえ、PKCの標的蛋白、更にはMrp2の内在化により深く関わる直接的な相互作用因子の同定が今後の課題と考え、Mrp2との相互作用因子、特にPKCによるリン酸化によって結合が影響されるという仮説に基づき、現在、Mrp2の分子中の最もコンセンサスリン酸化サイトの密集する部分に着目した方法論を展開しつつある。具体的にはラットMrp2のN末側のATP加水分解領域の直後の細胞質領域(リンカー領域)をベイトにして酵母two-hybrid法によってヒト肝臓のcDNAライブラリーより相互作用因子のクローン単離を試みた。

研究成果

• [雑誌論文] Vectorial transport of unconjugated and conjugated bile salts by monolayers of LLC-PK1 cells doubly transfected with human NTCP and BSEP or with rat Ntcp and Bsep. (2006)
  • 著者名/発表者名: Mita S, Suzuki H, Akita H, Hayashi H, Onuki R, Hofmann AF, Sugiyama Y
  • 雑誌名: Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 290(3) ページ: G550-G556
• [雑誌論文] Mrp2/Abcc2 transport activity is stimulated by protein kinase Calpha in a baculo virus co-expression system (2005)
  • 著者名/発表者名: Ito K, Wakabayashi T, Horie T.
  • 雑誌名: Life Sci 77 ページ: 539-550
• [雑誌論文] Apical/Basolateral surface expression of drug transporters and its role in vectorial drug transport. (2005)
  • 著者名/発表者名: Ito K, Suzuki H, Horie T, Sugiyama Y.
  • 雑誌名: Pharm Res 22 ページ: 1559-1577
• [雑誌論文] Two common PFIC2 mutations are associated with the impaired membrane trafficking of BSEP/ABCB11. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hayashi H, Takada T, Suzuki H, Akita H, Sugiyama Y
  • 雑誌名: Hepatology 41(4) ページ: 916-924
• [雑誌論文] Regulation of the cell surface expression of human BCRP/ABCG2 by the phosphorylation state of Akt in polarized cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Takada T, Suzuki H, Gotoh Y, Sugiyama Y
  • 雑誌名: Drug Metab Dispos 33(7) ページ: 905-909
• [雑誌論文] Treatment of hyperbilirubinemia in Eisai hyperbilirubinemic rat by transfecting human MRP2/ABCC2 gene. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hirouchi M, Suzuki H, Sugiyama Y
  • 雑誌名: Pharm Res 22(4) ページ: 661-666
• [雑誌論文] Characterization of polarized expression of point- or deletion-mutated human BCRP/ABCG2 in LLC-PK1 cells. (2005)
  • 著者名/発表者名: Takada T., Suzuki H., Sugiyama Y.
  • 雑誌名: Pharm.Res. 22 ページ: 458-464
• [雑誌論文] Transport by vesicles of glycine- and taurine-conjugated bile salts and taurolithocholate 3-sulfate : A comparison of human BSEP with rat Bsep. (2005)
  • 著者名/発表者名: Hayashi H., Takada T., Suzuki H., Onuki R., Hofmann AF., Sugiyama Y.
  • 雑誌名: Biochim.Biophys.Acta 1738 ページ: 54-62
• [雑誌論文] Impaired expression of hepatic multidrug resistance protein 2 is associated with posthepatectomy hyperbilirubinemia in patients with biliary cancer. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yamada T., Arai T., Nagino M., Oda K., Shoda J., Suzuki H., Sugiyama Y., Nimura Y.
  • 雑誌名: Langenbecks Arch.Surg. 390 ページ: 421-429
• [雑誌論文] Identification of the hepatic efflux transporters of organic anions using double-transfected Madin-Darby canine kidney II cells expressing human organic anion-transporting polypeptide 1B1 (OATP1B1)/multidrug resistance-associated protein 2, OATP1B1/multidrug resistance 1, and OATP1B1/breast cancer resistance protein. (2005)
  • 著者名/発表者名: Matsushima S., Maeda K., Kondo C., Hirano M., Sasaki M., Suzuki H., Sugiyama Y.
  • 雑誌名: J.Pharmacol.Exp.Ther. 314 ページ: 1059-1067
• [雑誌論文] Lack of improvement of oral absorption of ME3277 by prodrug formation is ascribed to the intestinal efflux mediated by breast cancer resistant protein (BCRP/ABCG2). (2005)
  • 著者名/発表者名: Kondo C., Onuki R., Kusuhara H., Suzuki H., Suzuki M., Okudaira N., Kojima M., Ishiwata K., Jonker JW., Sugiyama Y.
  • 雑誌名: Pharm.Res. 22 ページ: 613-618
• [雑誌論文] Role of breast cancer resistance protein (Bcrp1/Abcg2) in the extrusion of glucuronide and sulfate conjugates from enterocytes to intestinal lumen. (2005)
  • 著者名/発表者名: Adachi Y., Suzuki H., Schinkel AH., Sugiyama Y.
  • 雑誌名: Mol.Pharmacol. 67 ページ: 923-928
• [雑誌論文] Functional assessment of ABCG2 (BCRP) gene polymorphisms to protein expression in human placenta. (2005)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi D., Ieiri I., Hirota T., Takane H., Maegawa S., Kigawa J., Suzuki H., Nanba E., Oshimura M., Terakawa N., Otsubo K., Mine K., Sugiyama Y.
  • 雑誌名: Drug Metab.Dispos. 33 ページ: 94-101