新規LOVタンパク質LKP2、TLP1の構造と機能の解明

2006 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17084003
• 研究機関: 香川大学
• 研究代表者: 清末 知宏 香川大学, 総合生命科学研究センター, 准教授 (80241248)
• 研究分担者: 安部 洋 理化学研究所, 実険植物開発室, 研究員 (90360479)
• キーワード: シロイヌナズナ / LOVタンパク質 / 青色光受容体 / F-boxタンパク質

研究概要

本研究の目的は、LKP2による葉運動、概日リズム、胚軸伸長、花芽形成時期の制御機構を明らかにすること、新規光受容体としてのTLP1(PLP:PAS LOV Proteinに改名)の特徴付けを行うこと、新規LOV光受容体AUREO(AUREOCHROME)の機能解明である。本年度は以下の知見等の成果を得た。
1.ルシフェラーゼ遺伝子をレポーターに用いてライン化したLKP2部分過剰発現体の概日リズムを測定した。
2.LKP2部分過剰発現体の花芽形成時期を調べた。
3.LKP2部分過剰発現体の胚軸長を連続光条件下で解析した。
4.LKP2とリプレッサー融合型CO(CO-Rep)をバレイショで過剰発現させ、その塊茎形成に与える効果を解析した。
5.PLPと相互作用因子との酵母2ハイブリッド系での相互作用は青色光で減弱するが、その際にPLPの分解が起こっていないことをイムノブロットによって示した。
6.大腸菌内で発現させたTLP1(PLP)のLOVドメインで450nm付近の弱い吸収が観察された。
7.フシナシミドロのbZIP-LOVタンパク質AUREOCHROME1(AURE01)のbZIP領域をGST融合タンパク質として大腸菌内で発現させ、コンペティターを用いたゲルシフトアッセイにより、DNA認識配列の特異性を解析した。8.AURE01全長をGST融合タンパク質として大腸菌内で発現させた後、GSTを酵素処理で切り離すことでAURE01タンパク質を取得後、ゲルシフトアッセイにより青色光がDNA結合に及ぼす影響を解析した。

研究成果

• [雑誌論文] Blue light diminishes interaction of PAS/LOV proteins, putative blue light receptors in Arabidopsis thaliana, with their interacting partners. (2008)
  • 著者名/発表者名: Ogura Y., Komatsu A., Zikihara K., Nanjo T., Tokutomi S., Wada M., Kiyosue T.
  • 雑誌名: J. Plant Res. 121 ページ: 97-105
  • 査読あり
• [雑誌論文] Genetic characterization of mutants resistant to the antiauxin p-chlorophenoxyisobutyric acid(PCIB)reveals that AAR3, a gene encoding a DCN1-like protein, regulates responses to the synthetic auxin 2,4-dichlorophenoxyacetic acid in Arabidopsis roots. (2007)
  • 著者名/発表者名: Biswas K. K., Ooura C., Higuchi K., Miyazaki Y., Nguyen V. V., Rahman A., Uchimiya H., Kiyosue T., Koshiba T., Tanaka A., Narumi I., Oono Y.
  • 雑誌名: Plant Physiol. 145 ページ: 773-785
• [雑誌論文] AUREOCHROME: a newly found novel photoreceptor required for photomorphogenesis in the blue light-receptor of heterokonts. (2007)
  • 著者名/発表者名: Takahashi F., Yamagata D., Ishikawa M., Fukamatsu Y., Ogura Y., Kasahara M., Kiyosue T., Kikuy ama M., Wada M., Kataoka H.
  • 雑誌名: Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104 ページ: 19625-19630
• [図書] ユビキチン-プロテアソーム系とオートファジー「植物の概日時計、花成時期制御とユビキチン」 (2006)
  • 著者名/発表者名: 高瀬智敬、小倉康裕、深松陽介、清末知宏
  • 総ページ数: 4
  • 出版者: 共立出版
• [産業財産権] 遺伝子発現制御方法、それに用いる遺伝子組換え用ベクターおよび遺伝子発現制御キット (2007)
  • 発明者名: 清末知宏、小倉康裕、深松陽介、片岡博尚、高橋文雄
  • 権利者名: 国立大学法人香川大学、国立大学法人東北大学
  • 産業財産権番号: 出願番号2007-217666
  • 出願年月日: 2007-08-23