| 研究課題/領域番号 |
17201015
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| 研究機関 | 奈良県立医科大学 |
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研究代表者 |
大西 武雄 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (60094554)
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| 研究分担者 |
大西 健 奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (50152195)
高橋 昭久 奈良県立医科大学, 医学部, 講師 (60275336)
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| キーワード | 放射線 / アポトーシス / 細胞死シグナル / 生存シグナル / 分子標的 |
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| 研究概要 |
目的
本年度は細胞死/細胞生存にかかわるシグナル伝達因子の機能発現を分子生物学的手法(siRNA、シグナル伝達阻害剤、分子シャペロン物質)により特異的に制御し、効率よくアポトーシスを導くことを目的としている。そこで、放射線照射後に誘導される細胞死/細胞生存シグナル伝達にかかわる因子XIAP(inhibitor of apoptosis protein ファミリーの1種を分子制御することにより放射線増感が予測できる。XIAPの機能発現をsmall interference RNA(siRNA)により特異的に抑制し、効率よくアポトーシスを導くことができるかを調べた。
方法
p53欠損ヒト非小細胞肺癌H1299細胞に正常型あるいは変異型p53遺伝子を導入した細胞(H1299/wtp、H1299/mp53)5を用いた。XIAP標的siRNA(21mer二本鎖RNA)を設計、合成してX線照射処理の2日前にliposomeで細胞内に導入した。ウエスタンブロッド法と免疫蛍光染色法でXIAP、caspase-3あるいはPARP蛋白質の量的変化と細胞内局在を検討した。ヘキスト染色法でアポトーシスの出現頻度を調べた。さらに、H1299/Wtp53あるいはH1299/mp53細胞をヌードマウス背部皮下に移植した後、背部に形成された腫瘍を5mm四方にミンスし大腿皮下に移植した。
結果
1.XIAP標的siRNA導入により放射線誘導caspase-3活性化とPARP断片化が増強された。
2.XIAP標的siRNA導入により放射線誘導アポトーシスが増強された。
3.ヌードマウス背部およびに大腿皮下にH1299/wtp53あるいはH1299/mp53腫瘍が形成された。
4.NBSl標的siRNA発現プラスミドが作製できた。
考察
XIAP-siRNAを用いてXIAP遺伝子発現を阻害することにより放射線誘導アポトーシスを増強することができた。従って、XIAP-siRNAは放射線感剤として有用である可能性が示唆された。また、p53遣伝子のみ異なるヒト非小細胞肺癌H1299細胞を用いてsiRNA発現プラスミドによる腫瘍増殖抑制効果について今後検討することが可能であることが分かった。
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