| 研究概要 |
昨年度、ほとんどのアミノグリコシド系抗生物質はDNAに対してある程度の親和性を示すことが明らかになったが、(6-4)光産物を有するDNAに対して選択的な結合の可能性が示唆された4種類について、最適化した条件で表面プラズモン共鳴(SPR)の測定を行った。その結果、いずれの化合物も損傷の有無による相違が見られなかった。しかし、ディスタマイシンAを使ってこの測定法の妥当性を検証したところ、他のいくつかの損傷DNAに対しては結合が観測されたにもかかわらず、(6-4)光産物に関しては特異的な結合を示すセンサーグラムが得られなかった。SPRの原理や装置を調べて原因究明のための実験を繰り返したが、この問題の解決には至っていない。今年度は新たに、抗生物質以外の化合物についても(6-4)光産物を有するDNAに結合する分子の探索を行った。アミノ糖を含むネオカルチノスタチンのクロモフォアはDNAのバルジに結合して鎖切断を起こすが、(6-4)光産物の部分はバルジと立体構造が類似している。そこで^<32>Pで標識したDNAをネオカルチノスタチンと反応させてゲル電気泳動で分析した((6-4)光産物を有するDNAの場合には(6-4)フォトリアーゼで塩基部を開裂させた)が、鎖切断は検出されなかった。さらに、(6-4)光産物と3本の水素結合を形成することが期待される化合物として2,3-ジアミノピリジンと1H-ベンゾ[de]キノリン-2,3-ジアミンを選び、現在、(6-4)光産物を有するDNAとの結合を円二色性スペクトルにより調べている。なお、ディスタマイシンAについては、蛍光共鳴エネルギー移動、ゲル電気泳動、NMR、等温滴定カロリメトリーおよびSPRによる分析の結果、通常の標的配列と同様に副溝の化学構造を認識することにより(6-4)光産物を有するDNAに結合することを明らかにした(論文投稿中)。
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