| 研究課題/領域番号 |
17300159
|
|---|
| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
|---|
研究代表者 |
佐藤 智典 慶應義塾大学, 理工学部, 教授 (00162454)
|
|---|
| 研究分担者 |
松原 輝彦 慶應義塾大学, 理工学部, 助教 (10325251)
|
|---|
| キーワード | インフルエンザウイルス / ヘマグルチニン / 糖脂質 / ファージライブラリー / ペプチド / 感染阻害 / バイオパニング / 進化分子工学 |
|---|
| 研究概要 |
GM3結合性ペプチドのファージライブラリーによるスクリーニングを行った。すでに見出されていたc01ペプチドをコードするコドンを混合塩基にすることでランダム変異を導入し、15残基のうち平均4.8アミノ酸が置換された分子進化ファージライブラリーを作製した。この変異ライブラリーを用いて、GM3単分子膜に対するアフィニティ-セレクションを行い、得られたファージクローンのGM3どの結合活性およびインフルエンザウイルスの細胞への感染阻害活性を評価した。得られた新規アミノ酸配列の中でc01と同等もしくはそれ以上の活性を有している配列が得られた。
また、インフルエンザウイルスヘマグルチニン(HA)に結合するペプチドをファージライブラリーよりセレクションを行った。以前のセレクションで得られたHAに結合する15アミノ酸残基の配列のHA認識に重要なアミノ酸(HA結合モチーフ)をアラニンスキャニングにより同定した。この結果を元に2種類の異なった手法によりランダム変異を導入した分子進化サブライブラリーを作製した。これらサブライブラリーを用いて再びH1型とH3型のHAに対して交互にバイオパニング操作を行った。セレクションにより得られた配列の結合活性をELISAによりHAとの結合活性の評価を行い、高い結合活性を有している2種類の配列を同定した。得られた新規ペプチド配列は、インフルエンザウイルスの細胞への感染を阻害した。
|
