| 研究課題/領域番号 |
17310051
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
環境技術・環境材料
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
中嶋 睦安 日本大学, 生物資源科学部, 教授 (10059660)
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| 研究分担者 |
砂入 道夫 日本大学, 生物資源科学部, 准教授 (80196906)
荻原 淳 日本大学, 生物資源科学部, 講師 (50256830)
安斎 寛 日本大学, 短期大学部・生物資源学科, 教授 (70168029)
岩淵 範之 日本大学, 生物資源科学部, 講師 (90328708)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2007
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| キーワード | Rhodococcus / バイオリメディエーション / 土壌汚染 / グリーンバイオテクノロジー / プロテオーム解析 / Thermodynamic calculations |
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| 研究概要 |
R.erythropolis PR-4は、培地/アルカンの二層培養系において、添加するアルカンの炭素数によって、アルカン粒子表面へ吸着する「吸着型」とアルカン粒子内へ転移する「転移型」の二つの異なる相互作用を示す株であり、バイオリメディエーションやバイオプロセスの宿主として期待されている。この場合、有機溶媒存在下での利用が想定されることから、有機溶媒と微生物細胞との相互作用を理解し、制御することが重要である。本研究ではこらの相互作用について物理化学的側面から検討を加えた。
吸着型の代表としてn-ドデカン(C12)を転移型の代表としてプリスタン(C19)を選び、これらの条件下での細胞面の電荷、疎水性、細胞表層の原子組成、界面ギブスエネルギー変化、および疎水性表面に対する細胞の吸着力を検討した。その結果、C19を添加し、培養することにより細胞表面の疎水性が増大し、界面ギブスエネルギーが減少することで、疎水性表面に対する吸着力が増大し、細胞がアルカン層に転移するものと考えられた。
各種培養条件から全タンパク質を抽出し、SDSPAGEを行った後、その発現パターンの違いなどをLC/MS/MSで解析した。その結果、プリスタン添加条件では、他の条件に比ベストレス応答タンパク質の過剰発現が確認された。そこで、これらの遺伝子をクローニングしPR-4株に導入し、二層培養下での細胞の局在性を検討した。同時に同遺伝の破壊を試みた。これまでに供試した条件で細胞の局在性が変化した形質転換体を取得したことから、今後の詳細な解析が望まれる。
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