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細胞増殖因子が受容体に結合すると両者は内在化し初期エンドソームに輸送される。その後初期エンドソームにおいて選別され細胞表面へはリサイクルされずにリソソームに運ばれ分解される。この選別輸送において、受容体のユビキチン化が選別シグナルとして機能している。本研究では、エンドソームにおいて受容体の選別輸送に中心的役割を果たしているHrs/STAM複合体に結合する蛋白質について解析し、以下の結果を得た。
1.STAMに結合する蛋白質として単離した脱ユビキチン化酵素UBPYについて、まず細胞内局在を調べた。Hrsを過剰発現した細胞ではUBPYはエンドソームに局在した。また酵素活性を欠損したUBPYはエンドソームに局在し、この局在はリガンド刺激によりエンドサイトーシスされたEGF受容体の局在と一致した。これらの結果は、UBPYの一部はエンドソームに存在し、EGF受容体の脱ユビキチン化に関与することを示唆している。次にUBPYがEGF受容体の選別輸送を制御しているかについて調べた。siRNAによりUBPYをknockdownした細胞ではEGF受容体の分解が促進された。この結果は、UBPYがユビキチン化レベルを調節することにより、エンドソームにおけるEGF受容体の選別輸送の制御に重要な役割を果たしていることを示唆している。
2.Hrsに結合する蛋白質として単離したALG2について機能の解析を行った。HrsあるいはALG2を過剰発現した細胞では、選別輸送に重要な役割を果たす蛋白質であるAlixが、エンドソームにおいてHrsおよびALG2と共局在した。またCa^<2+>イオノフォアA23187で細胞を処理すると、AlixはALG2と共局在した。これらの結果は、ALG2はCa^<2+>依存的にAlixをエンドソームにリクルートする役割により受容体の選別輸送に機能することを示唆している。
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