|
本研究は、出芽酵母とシロイヌナズナを用いた分子遺伝学的・生化学的解析によって、糖鎖修飾を介した小胞体品質管理の分子機構を明らかにすることを目的としている。前年度までに、酵母小胞体において異常糖タンパク質の小胞体関連分解(ERAD)にあずかるマンノシダーゼMnl1pが、protein disulfide isomerase (PDI)と相互作用することを明らかにしてきた。本年度は、PDIとの相互作用に欠損を持つMnl1p変異体の解析を行い、Mnl1pとPDIとの相互作用はMnl1pの機能発現に必要であることを示した。また、出芽酵母には4種類のPDIホモログが存在するが、PDIとは異なり、これらはMnl1pとは相互作用しないことが示された。本研究では、ERADにおける基質認識機構を解析するための新規ERAD基質として、出芽酵母の代表的なERAD基質であるCPY*を元にして、CPYのユニットがタンデムにつながったCPY*-CPYとCPY*-CPY*を開発した。そして、CPY*のERADシグナルとなるN結合型糖鎖を除去した変異体を用いた解析によって、ERADシグナルとなるN結合型糖鎖は、高次構造が異常なユニットに存在することが必要であることを示した。シロイヌナズナを用いた解析では、酵母のERADにおいて糖鎖認識に関与すると考えられているYos9pのシロイヌナズナホモログAtOS9と、酵母タンパク質マンノース転移酵素との間で相同性の高いドメインを持つAt2g25110について解析を行った。これらの遺伝子破壊株は生育可能であるとともに、At2g25110が小胞体に局在していることが示された。
|
