| 研究課題/領域番号 |
17380197
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
増田 税 北海道大学, 大学院・農学研究院, 教授 (60281854)
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| 研究分担者 |
阿部 純 北海道大学, 大学院・農学研究院, 助教授 (00192998)
金澤 章 北海道大学, 大学院・農学研究院, 助教授 (30281794)
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| キーワード | ウイルスベクター / ダイズ / ファンクショナルゲノミクス / ジーンサイレンシング |
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| 研究概要 |
昨年度、我々は、ダイズに感染するキュウリモザイクウイルス(CMV-Sj)をダイズ用のウイルスベクターとして開発することに成功している。さらにこのベクターにGFP遺伝子の部分断片を挿入して、タバコにサイレンシング(VIGS)を誘導できることを確認し、プロトタイプのVIGSベクターを完成させている。今年度は、当初計画にのっとり、ダイズのアントシアニン生合成経路のキー酵素であるカルコンシンターゼ(CHS)遺伝子をターゲットとして実験を行った。まず、ダイズの種皮で発現量の高いCHS7遺伝子のORF中の70塩基程度をアンチセンス方向で複製するようにCMVベクターにクローニングした。この組換えウイルスをタバコに接種し、感染性を確認した。次に、CHSの発現によって茶色の豆をつけるダイズ(茶豆)にこのウイルスを感染させたところ、このウイルスはダイズでも全身感染し、初期に軽いモザイクを誘導した。しかし、感染ダイズは健全植物と同等に生育し、種子の収穫にも大差なかった。得られた種子の色を観察したところ、約1/3の種子で大幅な退色が観察され、中には黄豆に近いものも存在した。残りの2/3についても茶と黄のキメラ模様となり、ウイルス感染によるCHSのVIGSがよく誘導された結果であると考えられる。この種皮からRNAを抽出し、ノーザン解析によってCHS mRNAの減少やCHS siRNAの存在を確認し、VIGSの誘導を証明した。すなわち、今年度はCMVベクターによってダイズの種子の表現型を変化させることに成功し、ダイズの未知の遺伝子の機能解析にこのベクターが有効であることを示唆する結果であった。次年度はこのベクターの有効性をさらに検証するために、アントシアニン生合成経路の他の遺伝子(例えば、F3'Hなど)を標的にして、同様の実験を予定している。
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