|
本研究の目的は、大腸菌複製開始蛋白質DnaAに関する我々自身の研究成果を活かしながら、真核生物の複製開始蛋白質ORCに関して、細胞周期に呼応した活性化・不活性化の分子機構を明らかにすることである。具体的には、(1)ORCのATP/ADP結合、及びATPase活性を調節する因子の検索、(2)ATPase活性を持たない変異ORCを発現する酵母変異株の作成とその解析、(3)ORCと膜リン脂質との相互作用が細胞内DNA複製において果たす役割の解明、(4)細胞内でORCに結合しているアデニンヌクレオチドを同定する方法の確立、以上の4つの研究を行う予定である。(1)ORCのATP/ADP結合、及びATPase活性を調節する因子の検索に関して今年度我々は、酵母2ハイブリッド法を用いて、ORCに結合する因子を検索した。その結果、ATP/ADP結合、及びATPase活性を調節する因子の候補を複数得た。(2)ATPase活性を持たない変異ORCを発現する酵母変異株の作成とその解析に関して今年度我々は、ATPase活性を持たない変異ORCを発見し(センサー2領域に変異を持つ)、それを発現する酵母変異株の作成に成功した。(3)ORCと膜リン脂質との相互作用が細胞内DNA複製において果たす役割の解明に関して今年度我々は、酵母核膜中に存在するリン脂質によりATP/ADP結合活性は阻害されるが、ATPase活性は影響を受けないことを発見した。(4)細胞内でORCに結合しているアデニンヌクレオチドを同定する方法の確立に関して今年度我々は、アッセイ条件の検討を行った。
|
