DNAマイクロアレイを用いた赤痢アメーバ病原機構の網羅的解明

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17390124
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 野崎 智義 群馬大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (60198588)
• 研究分担者: 中野 由美子 国立感染症研究所, 寄生動物部, 主任研究官 (30321764)
• キーワード: 腸管原虫 / 病原性 / 網羅的解析 / 感染症 / 寄生 / 赤痢アメーバ / トランスクリプトーム / システインプロテアーゼ

研究概要

赤痢アメーバの病原機構を網羅的に理解することを目的として、全タンパク質コード遺伝子をカバーしたDNAマイクロアレイを用いて、赤痢アメーバの遺伝子発現プロファイルの作成を試みた。米国TIGRの赤痢アメーバゲノムデータベースに存在するタンパク質をコードする全遺伝子9435のうち、重複を除いた7712遺伝子に関して、それぞれ8-16種類の25merのプローブをもつアフィメトリクス社製のアレイを作成した。ラボのリファレンス株を用いた発現プロファイル解析によると、80%以上の遺伝子の発現が確認された。結果の評価には同一検体のトリプリケートが必要であることが解った。次に、遺伝的背景が同一で病原性の異なる株を2系列作製することに成功した。病原性の増強はクリシジア原虫との共培養とハムスター肝臓への感染を5-10回繰り返すことで行い、逆に減弱は無菌培養の1年以上の継続により行った。更に、確立したインビトロ・インビボ病原性評価系を用いて、得られた株のインビトロ・インビボでの病原性の相違を確認したところ、哺乳動物細胞モノレイヤーの破壊、動物感染における肝膿瘍の形成いずれの基準でも明らかな病原性の相違を示した。更に、これら病原性の異なる株間での貪食胞(ファゴソーム)の酸性化・分解の動態を調べたところ、これらのパラメータは病原性と逆相関を示すことが明らかとなった。以上の成果により、次年度に計画されている、病原性の異なる株間での発現パターンの比較を行う準備が完全に整った。

研究成果

• [雑誌論文] Kinetics and strain variation of phagosome proteins of Entamoeba histolytica by proteomic analysis. (2006)
  • 著者名/発表者名: Okada, M., Huston, C.D., Oue, M., Mann, B.J., Petri, Jr., W.A., Kita, K., Nozaki, T.
  • 雑誌名: Mol.Biochem.Parasitol. 145 ページ: 171-183
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Entamoeba histolytica : Differences in phagosome acidification and degradation between attenuated and virulent strains. (2006)
  • 著者名/発表者名: Mitra, B.N., Kobayashi, S., Saito-Nakano, Y, Nozaki, T.
  • 雑誌名: Exp.Parasitol. (In press)
• [雑誌論文] Proteomic analysis of phagocytosis in the enteric protozoan parasite Entamoeba histolytica. (2005)
  • 著者名/発表者名: Okada, M., Huston, C.D., Mann, B.J., Petri, Jr., W.A., Kita, K., Nozaki, T.
  • 雑誌名: Eukaryot.Cell 4 ページ: 827-831
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] The diversity of Rab small GTPases in Entamoeba histolytica. (2005)
  • 著者名/発表者名: Saito-Nakano, Y., Loftus, B.J., Hall, N., Nozaki, T.
  • 雑誌名: Exp.Parasitol. 110 ページ: 244-252
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Differences in morphology of phagosomes and kinetics of acidification and degradation in phagosomes between the pathogenic Entamoeba histolytica and the non-pathogenic Entamoeba dispar. (2005)
  • 著者名/発表者名: Mitra, B.N., Yasuda, T., Kobayashi, S., Satio-Nakano, Y., Nozaki, T.
  • 雑誌名: Cell Motil.Cytoskeleton 62 ページ: 84-99
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A retromerlike complex is a novel Rab7 effector that is involved in the transport of the virulence factor cysteine protease in the enteric protozoan parasite Entamoeba histolytica. (2005)
  • 著者名/発表者名: Nakada-Tsukui, K., Saito-Nakano, Y., Ali, V., Nozaki, T.
  • 雑誌名: Mol.Biol.Cell 16 ページ: 5294-5303
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification and gene expression analysis of a large family of transmembrane kinases related to the Gal/GalNAc lectin in Entamoeba histolytica. (2005)
  • 著者名/発表者名: Beck, D.L., Boettner, D., Dragulev, B., Ready, L., Mackey, A.J., Nozaki, T., Pearson, W.R., Petri, Jr., W.A.
  • 雑誌名: Eukaryot.Cell 4 ページ: 722-732