| 研究課題/領域番号 |
17390202
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
中園 一郎 長崎大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 教授 (30108287)
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| 研究分担者 |
津田 亮一 長崎大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 講師 (20098875)
池松 和哉 長崎大学, 大学院医歯薬学総合研究科, 准教授 (80332857)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | SAGE法 / 窒息 / 頚部圧迫 / マウス / 脳 / IEGs |
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| 研究概要 |
Serial Analysis of Gene Expression(SAGE)法は、遺伝子の転写発現状態を多面的にかつ詳細に検討・解析できる唯一の方法である。しかしながら、その手技の煩雑さによりしばしば実験途中でTagを失うこと、また、Tagの短さにより異なる遺伝子でも同様のTagを有してしまう欠点があることも知られている。我々は、Tagを多量に取得でき、また、Tagの長さをより長くできるSAGE法の欠点を改良したMicro and Long SAGE(ML SAGE)法を開発した。この方法によって容易に良質のTag cDNA Libraryを構築できるようになった。このML SAGE法を利用してマウス前脳皮質における窒息特異的遺伝子を検索した。具体的には頚部圧迫処置を施し死亡したマウス(Hanging群)と断頭処置したマウス(Control群)よりRNAを抽出し、ML-SAGE法にてTag cDNA Libraryを構築し、Tag情報を解析した。その結果、Hanging処置マウスで12094 Tag、1827遺伝子、Controlマウスで12590Tag、1889遺伝子の発現が認められた。両者の比較にて、Hanging処置マウスでRho BやLrrn6等の遺伝子が増加し、BaiaP2やFkbp8等の遺伝子が減少していた。この結果は、定量的PCRにて確認し、統計学的に有意な差も認められた。従って、これらの遺伝子が窒息特異的遺伝子であることが示唆される。また、この結果より、Immediate Early Gene(IEGs)が発現していることが推定されたので、q-PCR法にてC-fos及びFos-Bの発現量について両群について計測したところ、以下の結果を得た。前脳CF:H群0.79+/-0.16、C群0.18+/-0.04。FB:H群0.62+/-0.19、C群0.21+/-0.06。海馬CF:H群0.85+/-0.22、C群0.12+/-0.03。FB:H群0.48+/-0.20、C群0.06+/-0.01。小脳CF:H群0.58+/-0.15、C群0.08+/-0.02。FB:H群0.39+/-0.12、C群0.13+/-0.04。また、全ての部位にて有意差を認めた。本結果より、窒息時のIEGsの全脳的な遺伝子発現が確認され、窒息特異的遺伝子の探索に全脳的な解析の必要性・有効性が示唆された。
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