C型肝炎ウイルスレプリコン系によるHCV増殖機構の解析とその制御

2005 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 17390216
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 榎本 信幸 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 教授 (20251530)
• 研究分担者: 前川 伸哉 山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助手 (70397298)
• キーワード: HCV / レプリコン / NS5A / インターフェロン / GFP

研究概要

●NS5A蛋白のリン酸化状態が、HCVの細胞内複製部位を制御することにより、HCV増殖能、インターフェロン抵抗性を制御していることが示唆されつつある。臨床的にはこのリン酸化はISDRによってコントロールされていると考えられ、これによりC型慢性肝炎の病態が規定されている。
●本研究では、臨床的に血中HCV-RNA量、インターフェロン効果を制御することが判明しているNS5A-ISDR変異のHCVレプリコン増殖に対する作用を解析した。特にNS5A-ISDR上流の過剰リン酸化部位のセリン残基については系統的なmutagenesis analysisを行い、レプリコン増殖成立にともない自然発生するこの部位のadaptive mutationの意義を検討した。その結果、HCVのインターフェロン効果に関連するNS5A-ISDRの変異がHCVレプリコンの増殖に大きな影響を与えることを明らかとした。
●NS5A-GFP融合蛋白発現レプリコンを作成、NS5A蛋白の細胞内動態をバイオイメージング可能とするシステムを構築のための基礎的検討を行った。NS5AのC末端側にGFPを融合させたHCVレプリコンを構築、Huh7細胞に導入しNS5A-GFP融合蛋白を発現するHCVレプリコン増殖細胞の確立を試みた。

研究成果

• [雑誌論文] Site-specific mutation of the interferon sensitivity-determining region(ISDR) modulates hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kohashi T, Maekawa S, Sakamoto N, Watanabe H, Tanabe Y, Chen C-H, Nakagawa M, Kakinuma S, Enomoto N, Watanabe M.
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis in press
• [雑誌論文] Expressional screening of interferon-stimulated genes for antiviral activity against hepatitis C virus replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Itsui Y, Sakamoto N, Kurosaki M, Kanazaw N, Tanabe Y, Koyama T, Takeda Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Sekine Y, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M
  • 雑誌名: J Viral Hepatitis in press