| 研究概要 |
心筋梗塞関連遺伝子であるリンフォトキシン-α,およびガレクチン-2の細胞内カスケードの解明を目的として,これらに相互作用するタンパク質の同定を行い,それらの機能解析を進めている.方法としては主に,Tandem affinity purification(TAP)法を用い,HeLa細胞,HEK293細胞,血管内皮,平滑筋細胞を材料として進めてきた.これまでにガレクチン-2の結合候補分子として,トールライクレセプターやレプチンレセプターといった細胞膜タンパクや炎症性物質のシグナル伝達に関連する分子群を同定し,現在,免疫沈降法を用いた結合の再確認を行っており,実際に結合の確認できたものについてはさらに細胞内での共局在について共焦点レーザー顕微鏡により確認を進めている.また,冠動脈血管内皮あるいは平滑筋細胞を用いた強制発現系あるいはRNA interference(RNAi)によるノックダウンの系によりLTA等の刺激による炎症性シグナルの変化,すなわち炎症性分子として知られている,インターロイキンや接着分子のmRNAの発現誘導状態の変化を検討し,実際に変化が見られた分子についてはその詳細なカスケードについてNFkBやNFATに特異的なプロモーターにレポータ遺伝子をつないだ系において調査を進めている.このような解析より疾患の発症や進展に重要と考えられる分子については,ヒト細胞内や動脈硬化層でどのような発現分布をしているかを確認するための特異的抗体の調整も現在進めている.
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