| 研究課題/領域番号 |
17390342
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| 研究機関 | 独立行政法人放射線医学総合研究所 |
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研究代表者 |
入江 俊章 独立行政法人放射線医学総合研究所, 分子認識研究グループ, チームリーダー (40160072)
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| 研究分担者 |
上原 知也 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 助手 (10323403)
小林 典裕 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (90205477)
今中 恭子 三重大学, 医学部, 助教授 (00242967)
荒野 泰 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (90151167)
棚田 修二 独立行政法人放射線医学総合研究所, 特別上席研究員 (40116950)
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| キーワード | 画像診断学 / 組織再構築 / 細胞外マトリクス / 遺伝子工学 / 抗体 |
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| 研究概要 |
樹立されたモノクローナルマウス抗テネイシンC(TNC)抗体ハイブリドーマや抗TNC Fab抗体、精製TNCを三重大学が作製、提供した。
神戸薬科大学にて、抗テネイシンC(TNC)scFv抗体作製の第2候補である4C8MSタイプを用い、抗体のC末端配列を改変してVH-linker-VL-Flag-GGGGSC(Cはメルカプト基を有する)とし、ラジオアイソトープによる標識が可能な分子を作製した。
ハイブリドーマから総RNAを抽出し、RT-PCR法によりH鎖およびL鎖のドメイン(VH, VL)の遺伝子をクローニングし、これらをoverlap extension PCRに付すことによりリンカー配列を介して連結し、scFv遺伝子を構築した。さらに適当な発現ベクターにサブクローニングしたのち大腸菌に導入して、可溶型scFvタンパク質を調整した。ScFv抗体の大量合成を目標として、TNC固定化カラムによる精製法を開発中である。
千葉大学では、キレート(EMCS-Bz-EDTA)を作製し、scFvに付加し、インジウム-111で標識する手法を確立した。
臨床実用化に向け、千葉大学と放射線医学総合研究所では、心筋梗塞モデルラットを作製し、ラジオアイソトープ標識Fab抗体を尾静注し、SPECTを撮像した。心臓超音波検査にて経過観察すると、心筋梗塞後の心拡大が大きいほうが、抗TNC抗体の集積量が高かった。また、星細胞腫ヌードマウスを作製し、ラジオアイソトープ標識抗体を尾静注した。臓器分布を調べ、SPECTを撮像し、癌の生体イメージングにも有効であることを確認した。
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