| 研究課題/領域番号 |
17390342
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| 研究機関 | 独立行政法人放射線医学総合研究所 |
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研究代表者 |
入江 俊章 独立行政法人放射線医学総合研究所, 分子イメージング研究センター, チームリーダー (40160072)
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| 研究分担者 |
上原 知也 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 助教 (10323403)
小林 典裕 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (90205477)
吉田 恭子 (今中 恭子) 三重大学, 医学部, 准教授 (00242967)
荒野 泰 千葉大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (90151167)
小高 謙一 分子イメージング研究センター, 研究員 (20443062)
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| キーワード | 画像診断学 / 組織再構築 / 細胞外マトリクス / 遺伝子工学 / 抗体 |
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| 研究概要 |
モノクローナルマウス抗テネイシンC(TNC)抗体ハイブリドーマ抗TNC Fab抗体、精製TNCを三重学が作製、提供した。また、TNCの発現を免疫組織染色し、評価した。
神戸薬科大学にて、抗TNC抗体4C8MSに由来するscFvのC末端配列を改変してVH-linker-VL-Flag-Cys(Cysはメルカプト基を有する)とし、ラジオアイソトープによる標識が可能な分子を作製した。
ハイブリドーマからRNAを抽出し、RT-PCR法によりH鎖およびL鎖のドメイン(VHとVL)の遺伝子をクローニングし、これらをoverlap extension PCRに付すことによりリンカー配列を介して連結し、scFv遺伝子を構築する。これを発現ベクターにサブクローニングしたのち大腸菌に導入して、可溶型scFvタンパク質を調製する。大量合成した抗体を効率よく大量に取得するために、精製法を開発した。
千葉大学と放医研ではインジウム-111を用い標識するキレート(EMCS-Bz-EDTA)を作製し、scFvに付加した。作製した心筋梗塞モデルラットに、ラジオアイソトープ標識抗体を尾静注し、臓器分布を調べた。
オートラジオグラムと隣接切片の病理評価を行いながら評価を行いながら、心筋梗塞による心筋壊死部に一致してscFvの集積が認められることを立証した。
さらに、4F10TTと4C8MS由来の抗TNC抗体の比較を行った。非特異抗体にキレートを付加し、インジウム-111を用い標識し、心筋梗塞モデルラットに尾静注し、臓器分布を調べた。オートラジオグラムと隣接切片の病理評価を行う。非特異抗体の集積が抗TNC抗体の診断能に影響を及ぼさないか確認した。
標識抗テネイシンC抗体の安全性を確認するため、心筋梗塞モデルラットに抗テネイシンC抗体を投与し、抗アネイシンC抗体投与後の長期経過を観察した。
特許出願予定である。
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