| 研究概要 |
1,軟骨細胞増殖および基質合成に対するPRP上清の効果
ウサギより麻酔下に血液(1羽あたり50ml)を採取してPRPの調整に、膝、肩関節より軟骨を採取して細胞培養に用いた。血液は速やかに遠心分離を行って、Platelet-rich plasma(PRP)とPlatelet-poor plasma(PPP)を精製し、トロンビンにて凝固させた際の上清を培養液に添加して用いた。軟骨細胞は、単層培養、Alginateゲル内三次元培養の両者を行い、細胞増殖および基質合成(コラーゲン、プロテオグリカン)能に対する効果を検討した。PRP群ではPPP群と比較して有意な細胞増殖および基質合成の促進を認めた。
2,組織工学的手法を用いた軟骨組織作製におけるPRP上清の効果
Alginateゲル内に包埋し2週間培養した軟骨細胞(および細胞周囲基質)を培養インサート上に播種してさらに2週間培養を行い、試験管内で軟骨組織を作製した(ARC法)。この作製過程でPRPまたはPPP上清を添加し、最終的に形成された軟骨組織を、生化学的、組織学的に解析した。PRP群では、コラーゲン含有量、プロテオグリカン含有量とも有意な増加を認め、組織学的にも細胞外基質成分に富んだ軟骨組織が形成されていた。
3,三次元培養軟骨細胞に対するPRPゲルの効果
精製したPRPにトロンビンを添加してPRPゲルおよびPPPゲルを作製し、細胞培養用プレート(12 well plate用)にコートした。このプレート上でAlginateゲル内に包埋した軟骨細胞を培養し、細胞増殖および基質合成(コラーゲン、プロテオグリカン)能に対する効果を検討した。PRP群ではPPP群と比較して有意な細胞増殖および基質合成の促進を認めた。
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