| 研究概要 |
口腔唾液腺腫瘍組織と細胞株、正常唾液腺組織について、網羅的な遺伝子発現とタンパク発現のプロファイリングによるマッピングを行い、さらに、疾患関連遺伝子を検索し、腫瘍の臨床諸指標と関連する分子腫瘍マーカーを検索することを目的とする。
まず、細胞株それぞれのtotal proteinを抽出し、蛍光色素であるCy2、Cy3、Cy5をそれぞれラベルし、2 dimensional difference in-gel electrophoresis(2D-DIGE)を行った。ゲル上に展開されたスポットを解析し、有意な発現差の認められたタンパクスポットをゲルから切り出し、質量分析装置(MALDI-TOF/MS)とpeptide mass fingerprinting(PMF)を用いてタンパクを同定した。これらの同定されたタンパクの確認のために、Affymetrix社製GeneChipで遺伝子発現パターンを調べ、さらに、プライマーを作製してreal time PCRで発現量を解析して、RNAレベルとタンパクレベルの発現状態の比較を行った。さらに、抗体のあるタンパクはWestern Blottingと免疫組織染色により発現状態を確認した。その結果、Stathmin, Maspin, SIGLEC 8, SERPINB2, BOK, LGALS7, ANXA8, FAT3, CDKN1A, FBN2, IGFBP2などの因子が有意に腫瘍において発現増強しており、ECHS 1, SOD 2, ALAD, Proapolipoprotein, SERPIN B1, NALP1, CASP8, CD28, ATP2B2などが発現減弱していた。これらの内、特に発現が腺系腫瘍で著しく亢進していたStathminとMaspinについて多くの腺癌組織で発現状態をmRNAレベルとタンパクレベルで検索した。その結果、Stathminは癌化との関連が強く示唆され、Maspinは腺癌の分化度、組織型との関連を強く示唆された。
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