| 研究課題/領域番号 |
17390564
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
社会系歯学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
雫石 聰 大阪大学, 大学院歯学研究科, 教授 (00028789)
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| 研究分担者 |
田中 宗雄 大阪大学, 歯学部附属病院, 講師 (90263300)
片岡 宏介 大阪大学, 大学院歯学研究科, 助手 (50283792)
前田 和彦 大阪大学, 大学院歯学研究科, 助手 (00346165)
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| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
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| キーワード | 歯周病細菌 / 菌体間相互作用 / バイオフィルム / GAPDH / 線毛 |
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| 研究概要 |
本研究では、まず、早期定着菌である口腔レンサ球菌の菌体表層glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)活性を測定し、Porphyromonas gingivalisとの共凝集活性との相関を調べた結果、菌体表層GAPDH活性と共凝集活性との間には強い相関があることがわかった。そこで、強い活性を示した口腔レンサ球菌5種のGAPDHを精製し、P.gingivalis線毛との結合特性を生体分子間相互作用解析装置(BIAcore)で調べた結果、すべて特異的かつ高親和性の結合を示した。また、それらのGAPDH遺伝子には95%以上の相同性が認められた。次に、リコンビナントGAPDH(rGAPDH)を作製・精製し、酵素処理後、逆層カラムを用いたHPLCによりペプチド断片画分を回収し、P.gingivalis線毛を結合させたM5センサーチップを用いて各画分の結合をBIAcoreにより測定した。強い結合が見られた画分を質量分析法およびアミノ酸シーケンサで解析した結果、アミノ酸残基166-183の領域がP.gingivalis線毛結合部位であることがわかった。化学合成により作製したこの領域に相当するペプチドはP.gingivalisと口腔レンサ球菌との共凝集を阻害することを確認した。
また、S.gordoniiランダムノックアウトライブラリを用い、混合バイオフィルムのスクリーニング方法を新規開発し、P.gingivalisとの混合バイオフィルム形成過程に関与するS.gordoniiの遺伝子群について調べた結果、S.gordoniiは多様な遺伝経路を通じて異菌種間の口腔バイオフィルムの成熟を統治することが示唆された。
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