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喫煙による肺胞マクロファージの遺伝子損傷と染色体への影響について、主要設備であるタバコ自動喫煙装置(ハンブルグII)を用いて、C57BL/6、雌、8週齢マウスに一定量、一定期間(10日間)、モニターNo.2リファレンスタバコを喫煙させ、喫煙マウスを作製した。喫煙後、マウスを麻酔死させ、主気管支を露出後注射器で主気管支内にPBSを1ml注入し回収する操作(気管支肺胞洗浄法)により肺胞マクロファージを採取し、DNAを抽出した。抽出したDNAを増幅し、さらに制限酵素でDNAを切断し、カラムを用いて、切断したDNAを精製した。コントロールとして非喫煙マウスから肺胞マクロファージを採取し、DNAを抽出後、同様の操作により切断してDNAを精製した。精製したDNAを蛍光色素で標識した。喫煙の染色体異常への影響については、正常マウスから、リンパ球を分離後、ConAにより分裂刺激を行い、染色体標本を作製し、上記で作成した標識DNAをハイブリダイズさせ、CGH法により各染色体ごとに解析を行っている。また、各染色体を認識出来るCGH染色体アレイを用いて、標識DNAをハイブリダイズ後、染色体の異常部位の検出と解析を現在進めている。一方、肺胞マクロファージの遺伝子損傷をコメット法を用いて検出する条件が基礎検討により決定したので、今後、喫煙により肺胞マクロファージの遺伝子、DNAが損傷を受けている可能性について検討するとともに、損傷程度をテールレングスとテールモニュメントにより正確に解析を加える予定である。また、これらの結果から、喫煙により影響を受ける染色体とその部位を特定後、遺伝子を特定し、損傷部位との関連について検討を加える予定である。
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