| 研究概要 |
タンパク質を網羅的に定量解析可能な抗体マイクロアレイを構築するためには,特異性や親和性の高い抗体を網羅的に作製する技術が不可欠である.本研究では,昆虫に特異的に感染するバキュロウイルスと培養昆虫細胞を利用し,特異性や親和性の高い抗体を迅速にかつハイスループットで創出できる新たな網羅的抗体作製技術の開発を目指す.本年度はまず,抗体分子をH鎖とL鎖が本来の形で会合したFabフラグメントとしてバキュロウイルスの表面に効率よく提示する技術の開発を試みた.このような技術が構築できると,ゲノム由来の抗体遺伝子ライブラリーなどから,本来の機能を保持した抗体分子を網羅的に表面提示したバキュロウイルスディスプレイライブラリーを作製可能であり,目的とするFabを提示したバキュロウイルスを選別することにより,目的の機能性抗体の遺伝子を取得できる.クロラムフェニコールモノエステルの加水分解反応を触媒する,マウス由来の触媒抗体6D9のFabフラグメントをモデル抗体として,またAutographa californica核多角体病ウイルス(AcNPV)をバキュロウイルスとして使用し,6D9のFabフラグメントのH鎖(Fd断片)を,AcNPVのエンベロープを構成する糖タンパク質gp64のN末端側に融合した形で発現し,L鎖を可溶性タンパク質として分泌発現する組換えバキュロウイルスを作製した.作製した組換えバキュロウイルスが抗原結合活性を有するFabフラグメントを表面に提示していることを酵素免疫測定法により確認することができた.
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