| 研究概要 |
1 生殖腺形成・性決定に関わる遺伝子座におけるクロマチン構造の解析
M33、トリメチルK28ピストンH3抗体を用いたChlP解析を行った。培養細胞(ES, Y-1,TTE3)およびマウス胎生11日の生殖隆起を用いた。
(1)Sry遺伝子座・Sox9遺伝子座(性決定関連遺伝子座)
Sryプロモーターおよび遺伝子上流下流5kbの範囲において有意なシグナルは得ていない。
Tiling Arrayによる解析を検討している。Sox9プロモーターにおいて両因子の集積を認めた。
(2)Lhx9遺伝子座・Ad4BP/Sf-1遺伝子座(生殖腺形成関連遺伝子座
Lhx9プロモーター上流2kb領域において両因子の集積を認めた。Ad4BP/Sf-1遺伝子座プロモーターおよび上流領域よりも強いシグナルが転写開始点下流2〜4kbに検出された。この領域はCpGアイランドに該当することから、M33によるDNAメチル化を介した標的遺伝子発現制御の可能性を示唆する。
2 M33機能領域の遺伝子改変マウスの作成および解析
Ad4BP/SF-1遺伝子5'遺伝子境界領域のコンディショナルな欠失を行うため、Cre-LoxPを用いたターゲティングベクターを理化学研究所発生再生研との共同研究として作成したが、その領域がAd4BP/Sf-1遺伝子のエンハンサーであることが明らかになり、さらに上記のように、より強くM33が集積する下流領域が詳細な解析により明らかになった。そのため、共同研究は一時中止し、改めて遺伝子改変ベクターの構築をおこなうことにした。作成に先立ち、in vivoでの発現制御機能を検定するため、Ad4BP/Sf-1遺伝子座転写開始点下流領域4kbを含むAd4BP/Sf-1プロモーターの発現がモニター可能なEGFPトランスジェニックマウスを作成した。正常マウス胚では、胎生11日の生殖腺体細胞においてはEGFP発現が認められた。しかし、M33KOマウス胚では、当該領域依存的発現は消失あるいは減弱した。この結果は、in vivoにおいて、Ad4BP/Sf-1遺伝子転写開始点下流領域を介したM33によるAd4BP/Sf-1遺伝子発現制御機構を強く示唆する。今後は、計画当初予定した当該領域改変マウスの作成をおこなう。
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