| 研究概要 |
本研究は、ジベレリン(GA)のシグナル伝達機構を解明することを目的とする。
(1)GAシグナル伝達因子のGA結合能の解析
今までに、単離、解析してきたDELLAタンパク質(SLR1),GID1,GID2の内いずれかが、GAの受容体である可能性について解析した。
1)in vitroにおけるGA結合活性を調べた結果、GID1のみがGAに結合し、SLR1,GID2は、結合しなかった。
2)活性型GAの一つであるジヒドロGA_4に対するK_d値は、約、10^<-6>Mであり、in vivoでの反応性とほぼ同等であった。
3)活性型GAには高い親和性を示し、不活性型GAには低い親和性を示した。
4)変位型アリルに対応する変異型GIDタンパク質は、GAと結合しなかった。
5)GID1過剰発現体形質転換イネは、GAを過剰に与えたような徒長型の形質を示した。
(2)GID1タンパク質とSLR1タンパク質との相互作用
GA存在下でのイースト・ツーハイブリッドを行い、GID1とSLR1が、GA依存的に相互作用することを明らかにした。
(3)GID1,SLR1タンパク質の構造解析
GID1,SLR1タンパク質を大腸菌で多量に合成し、現在結晶化の予備実験をほぼ終了した。
(1)、(2)の結果より、GID1が、GAの細胞内受容体であると結論した。また、GAのシグナル伝達は、1)細胞内受容体であるGID1にGAが結合することが引き金になって、GID1がSLR1に結合し、安定的なGID1-GA-SLP1複合体を形成する、2)その複合体が、特異的にSCF^<GID2>のターゲットとなり、ユビキチン依存的に分解され、ジベレリン応答がおこる、の2段階からなることが推定された。
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