| 研究概要 |
本研究は、ジベレリン(GA)のシグナル伝達機構を解明することを目的とする。
*(1)GID1とSLR1の相互作用の解析
ジベレリン非感受性極矮性変異体イネgid1の原因遺伝子は、リパーゼとよく似たタンパク質をコードしていた。GID1タンパク質はジベレリンと結合し、様々な性質からGID1がジベレリンの核内受容体であると結論した。さらに、イーストハイブリッドアッセイにより、GID1がジベレリンと結合すると、抑制因子であるSLR1と特異的に結合することを証明した。次に、in vitroにおけるGID1-GA-SLR1複合体の形成をゲルろ過法により解析した。His-tagをつけた全長のGID1タンパク質に対して、SLR1タンパク質(M1からH327の領域)をジベレリン存在下または非存在下でインキュベーションした後、ゲルろ過を行ったところジベレリン依存的に結合した。さらに、このSLR1を基にして、様々なSLR1のデリーションコンストラクトを作成したところ、N末のDELLA、TVHYNPドメインのどちらかが欠損するとGID1と結合できなくなった。これらのことから、この2つの領域がGID1との結合に必要であることが明らかとなった。
(2)SLR1とGID2との相互作用の解析
ジベレリン依存的にGID1と結合したSLR1は、Fボックスタンパク質であるGID2と特異的に結合すると考えられる。そこで、yeast three hybrid法によりGID1,SLR1,GID2 3者の結合様式を調べた。その結果、GID2は、ジベレリン、GID1が存在している時のみSLR1と結合することが明らかとなった。
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